[發(fā)明專利]一種用免疫透射比濁法測(cè)定載脂蛋白A2的方法及試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110339949.0
• 申請(qǐng)日: 2011-11-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102507957A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N21/82
• 代理公司: 北京銀龍知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11243
• 代理人: 金鮮英;馮云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種測(cè)定載脂蛋白A2的方法及所述方法使用的試劑盒，具體地本發(fā)明涉及一種用免疫透射比濁法測(cè)定載脂蛋白A2的方法及所述方法使用的試劑盒。

背景技術(shù)

載脂蛋白A?II(ApoA?II)是高密度脂蛋白(HDL)中第二種含量多的載脂蛋白。ApoA?II由兩條多肽鏈的77個(gè)氨基酸殘基組成，在不加還原劑的十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)中測(cè)出其分子量是17000D，在人血漿中以二聚體形式存在。ApoA?II的單體分子量為8700D。人ApoA?II蛋白C端氨基酸殘基為谷氨酸，N端為吡咯烷酮酸，缺乏組氨酸，精氨酸及色氨酸。ApoA?II有多態(tài)性存在，最主要的多態(tài)型等電點(diǎn)為4.9，而含量較少的多態(tài)型的等電點(diǎn)為5.17、4.68、4.42和4.20。

ApoA?II的生理功能之一是維持HDL結(jié)構(gòu)，ApoA?II肽段12-31和肽段50-77具有與磷脂的結(jié)合能力，經(jīng)二級(jí)結(jié)構(gòu)分析認(rèn)為，殘基17-30和51-62形成的雙性螺旋結(jié)構(gòu)是人ApoA?II與脂質(zhì)結(jié)合的分子基礎(chǔ)，也可能參與HDL受體的識(shí)別，在HDL的代謝中具有重要作用；其二是激活肝脂酶，用以水解乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯(TG)和磷脂(PL)。體外實(shí)驗(yàn)表明，它可能具有抑制卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)和肝磷脂的作用。測(cè)定人血漿中ApoA?II的含量對(duì)研究HDL代謝，探討動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病的發(fā)病機(jī)理及臨床診斷有重要意義。流行病學(xué)及臨床研究表明，ApoA?II含量與冠心病呈負(fù)相關(guān)，與心肌梗塞呈高度負(fù)相關(guān)。測(cè)定血漿ApoA?II、ApoA?I及ApoB100含量，可替代血脂的測(cè)定作為冠心病診斷的參考指標(biāo)。

目前一般采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清脂蛋白Apoa?II。酶聯(lián)免疫法的原理是：將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體；洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加待測(cè)樣品，使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓樣品中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與樣品中待測(cè)物質(zhì)的量正相關(guān)。加底物，夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。

現(xiàn)有的測(cè)定血清脂蛋白Apoa?II的方法存在著操作繁瑣，設(shè)備要求高，樣品預(yù)處理復(fù)雜，不能直接在全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行批量檢測(cè)分析，對(duì)高脂、黃疸、溶血樣本抗干擾能力差的缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是克服現(xiàn)有的測(cè)定載脂蛋白A2的方法操作繁瑣，設(shè)備要求高，樣品預(yù)處理復(fù)雜，不能直接在全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行批量檢測(cè)分析，對(duì)高脂、黃疸、溶血樣本抗干擾能力差的缺點(diǎn)，提供一種操作以及預(yù)處理過(guò)程簡(jiǎn)單、能直接在全自動(dòng)生化分析儀上批量檢測(cè)分析，且對(duì)高脂、黃疸、溶血樣本抗干擾能力強(qiáng)的用免疫透射比濁法測(cè)定載脂蛋白A2的方法。

現(xiàn)有技術(shù)沒(méi)有使用免疫透射比濁法測(cè)定載脂蛋白A2的先例，本發(fā)明的發(fā)明人付出了大量地創(chuàng)造性勞動(dòng)，大膽地采用免疫透射比濁法測(cè)定載脂蛋白A2的方法，并且摸索出了該方法實(shí)現(xiàn)測(cè)量的條件和使用的試劑所組成的試劑盒。

本發(fā)明提供了一種用免疫透射比濁法測(cè)定載脂蛋白A2的方法，其包括：

向待測(cè)樣品中加入反應(yīng)劑，解除樣本中抗原周圍的電子層和水化層，使抗原位點(diǎn)充分暴露；

向待測(cè)樣品中加入抗ApoA?II抗體溶液，形成不溶性的抗原-抗體復(fù)合物；

測(cè)定所述不溶性抗原-抗體復(fù)合物的吸光度值，與已知ApoA?II抗原濃度的校準(zhǔn)液的吸光度值比較；

通過(guò)以下公式計(jì)算出樣本中ApoA?II的含量：

式中：ΔAu為以空白管吸光度為對(duì)照的待測(cè)樣品的吸光度值

ΔAs為以空白管吸光度為對(duì)照的校準(zhǔn)品的吸光度值

Cs為校準(zhǔn)品中ApoA?II的濃度；

其中，所述反應(yīng)劑包括：防腐劑0.2-1.5g/L、穩(wěn)定劑0.5-3g/L、電解質(zhì)0.1-6g/L、表面活性劑1-10g/L，高分子加速劑2-5g/L和反應(yīng)促進(jìn)劑0.1-0.5g/L，其余是10-200mmol/L的緩沖液；

所述抗ApoA?II抗體溶液包括：抗ApoA?II抗體5-60g/L、抗氧化劑0.01-0.8g/L、穩(wěn)定劑1-30g/L，防腐劑0.01-5g/L、電解質(zhì)0.1-6g/L、高分子加速劑2-5g/L和表面活性劑0.1-10g/L，其余是10-200mmol/L的緩沖液；