[發(fā)明專利]桃潰瘍病診斷方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110338284.1
• 申請(qǐng)日: 2011-11-01
• 公開（公告）號(hào): CN102373262A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方麗;王漢榮;任海英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 向慶寧

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于果樹病害診斷方法，特別屬于一種快速鑒定桃樹潰瘍病診斷方法。

背景技術(shù)

桃（Prunus?persica?(L.)?Batsch?var.nucipersica）屬薔薇科李屬桃亞屬植物，原產(chǎn)我國陜西，至今已有3000多年的栽培歷史。

桃枝枯病是由半知菌亞門擬莖點(diǎn)霉屬真菌核果果腐擬莖點(diǎn)菌（Phomopsis?amygdali,?原Fusicoccum?amygdali）引起，該病原菌在1997年前為浙江省檢驗(yàn)檢疫病害，一般稱為桃潰瘍病。該病害由皮孔或花芽進(jìn)入，主要危害桃樹枝條，形成環(huán)狀略凹陷褐色枯斑，枝葉迅速枯黃。2009年以來，嘉興鳳橋鎮(zhèn)的水蜜桃生產(chǎn)上出現(xiàn)了一種嚴(yán)重的桃枝葉枯萎病，農(nóng)戶俗稱桃枝枯病，病害發(fā)生蔓延快，果園隨處可見農(nóng)戶修剪下的成堆枯枝。可造成當(dāng)年桃約20%-50%的產(chǎn)量損失，嚴(yán)重的整棵桃樹死亡。4-6月份是該病害的高發(fā)期，3-11月份均可發(fā)病。雨后更容易造成病害的傳播蔓延。

該病早期癥狀容易與蟬幼蟲形成的枝枯類似，病害后期易與桃的癌腫病、褐腐病等其他病害混淆。

通常，鑒定一種病害微生物的傳統(tǒng)方法就是采取感病果樹的枝條或葉片，進(jìn)行室內(nèi)分離培養(yǎng)，然后通過對(duì)致病微生物進(jìn)行形態(tài)或顯微鏡觀察大致確認(rèn)為何種微生物。目前，還可以通過結(jié)合基因序列的擴(kuò)增來比較各種微生物之間的親緣關(guān)系進(jìn)行確認(rèn)。這些方法固然可靠，可是只能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行操作，不適宜普遍推廣，另外這些技術(shù)需要專業(yè)操作技能和背景。為了快速的診斷病害，快捷簡便的區(qū)別病害種類，為及時(shí)防治病害提供依據(jù)，這就需要一種快速鑒定或診斷該病害的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明研究小組驚訝的發(fā)現(xiàn)，在自然情況下，桃樹潰瘍病的發(fā)病后期，在桃樹的病皮上，出現(xiàn)密集的小黑點(diǎn)，為病原菌的分生孢子器，隨后，在適當(dāng)?shù)臈l件下，由黑點(diǎn)頂端擠出乳白色漿狀物，并逐漸變?yōu)殚冱S色，為病原菌的分生孢子角。孢子角邊擠邊干，形成細(xì)長的卷。

本發(fā)明研究小組驚訝的發(fā)現(xiàn)桃潰瘍病能在桃樹上能形成分生孢子角。分生孢子角是否的形成是區(qū)別桃樹上其它病害的簡易方法。另外,本發(fā)明小組也發(fā)現(xiàn),?在室內(nèi)通過簡便快速的培養(yǎng)可以快速的鑒別是否為桃樹潰瘍病，而且在室內(nèi)的條件下，該病不產(chǎn)生分生孢子角，相反產(chǎn)生分生孢子液。?

為了解決傳統(tǒng)問題，本發(fā)明提供一種快速診斷桃潰瘍病的方法，能夠在發(fā)病早期進(jìn)行室內(nèi)診斷，為及時(shí)防治提供依據(jù)。該方法快速簡便，成本低，而且容器操作，不需要昂貴的設(shè)備。?本發(fā)明的方法包括：（1）、取桃樹上面有可見密生小黑點(diǎn)的枝條，截取5-8?cm；（2）、把所述的桃枝放置在濕度大于75%，小于100%，溫度為大于10℃，小于40℃下培養(yǎng)至少1天以上。（3）、如果桃枝小黑點(diǎn)上長出有分生孢子液，就判斷為桃潰瘍病。

小黑點(diǎn)即為黑色的分生孢子器：灰白表皮下有隆起的針眼大小的顆粒，部分破開表皮形成孔口，露出皮下黑色分生孢子器。

在一個(gè)優(yōu)選的方式中，如果在恒溫恒濕條件下，桃潰瘍病分生孢子器擠出的分生孢子液不形成角狀，呈水珠狀。

在一個(gè)優(yōu)選的方式中，濕度大于75%，溫度為20℃-40℃，培養(yǎng)的時(shí)間為3天。?更優(yōu)選的，溫度為25℃-35℃條件，濕度為84%-98%。?更優(yōu)選的，培養(yǎng)的時(shí)間為3-7天。

具體實(shí)施方式

1.????材料與方法

硫酸鉀、氯化鉀、氯化鈉、重鉻酸鉀、氯化鎂。該試劑均為分析級(jí)，購自阿拉丁試劑公司。桃枝為田間當(dāng)年發(fā)病枝條，截取5?cm枝條，枝條上面可見密生小黑點(diǎn)（該枝條是通過常規(guī)方法確定為桃樹潰瘍病的發(fā)病樹枝）。同時(shí)也準(zhǔn)備一些桃樹上其他病害的枝條（該枝條是通過常規(guī)方法確定不是桃樹潰瘍病的發(fā)病樹枝），作為對(duì)照試驗(yàn)。

方法采用飽和鹽溶液標(biāo)準(zhǔn)濕度場來測定，這些感病桃樹枝條在固定不同濕度下分生孢子分泌情況，同時(shí)設(shè)置不同的溫度。飽和鹽溶液標(biāo)準(zhǔn)濕度固定點(diǎn)數(shù)據(jù)參照表1的數(shù)值。

表1?飽和鹽溶液相對(duì)濕度表

將病枝枝條放置在架子上，下面裝有250?mL飽和鹽溶液，整個(gè)盒子透明密封，?并置于不同的濕度下，12?h光照/12h黑暗，在培養(yǎng)箱的5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃溫度下培養(yǎng)，每天觀察記錄病枝分生孢子角分泌情況。

結(jié)果與分析