[發明專利]鞭毛運動蛋白及其編碼基因和它們的應用

有效

• 申請號: 201110338050.7
• 申請日: 2011-10-31
• 公開（公告）號: CN103087158A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 馬延和;翟磊;薛燕芬
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/31;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;A01H5/00
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 王浩然;王鳳桐

技術領域

本發明涉及一種鞭毛運動蛋白，還涉及鞭毛運動蛋白的編碼基因，以及含有鞭毛運動蛋白基因的重組載體和細胞，以及鞭毛運動蛋白及其編碼基因含有該基因的重組載體及細胞在培育具有耐堿性轉基因生物中的應用。

背景技術

在某些細菌菌體上具有細長而彎曲的絲狀物，稱為鞭毛(flagellum)。鞭毛的長度常超過菌體若千倍。在某些菌體上附有細長并呈波狀彎曲的絲狀物，少則1-2根，多則可達數百根，是細菌的運動器官。多數細菌就是依靠鞭毛進行運動的，而鞭毛的運動主要是借助鞭毛運動蛋白(flagellar?motor?protein)來完成整個過程。

US?2008095793報道了衣原體鞭毛蛋白抗原在衣原體的防治與診斷方面的應用，將衣原體鞭毛蛋白作為衣原體防治的主要指標。WO?2005089429以及US?2007218048報道了精子的鞭毛能量攜帶蛋白以及精子的鞭毛能量攜帶蛋白早精子活力診斷的應用。

目前關于鞭毛及鞭毛蛋白的研究主要集中在細菌分類鑒定，分子診斷以及鞭毛表位的抗體等方面。

發明內容

本發明的發明人基于對鞭毛運動蛋白的分子生物學研究，意外地發現從嗜堿單胞菌(Alkalimonas?amylolytica?N10，CGMCC?NO.0463)中得到了一種鞭毛運動蛋白及其編碼基因，另一方面還提供了含有鞭毛運動蛋白基因的重組載體和細胞，以及鞭毛運動蛋白及其編碼基因含有該基因的重組載體及細胞在培育具有耐堿性轉基因生物中的應用。

本發明提供了一種鞭毛運動蛋白，其中，該鞭毛運動蛋白具有SEQ?ID?No：2所示的氨基酸序列，或者該鞭毛運動蛋白具有將SEQ?ID?No：2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加后仍具有鞭毛運動蛋白活性的氨基酸序列。

本發明還提供了一種鞭毛運動蛋白基因，其中，該基因具有SEQ?ID?No：1所示的核苷酸序列，或者該基因具有編碼SEQ?ID?No：2所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

另外，本發明還提供了一種重組載體，其中，該重組載體含有本發明提供的鞭毛運動蛋白基因。

本發明還提供了一種轉基因細胞，其中，該轉基因細胞含有本發明提供的鞭毛運動蛋白基因。

本發明還提供了得到的鞭毛運動蛋白及其編碼基因、含有該基因的重組載體及轉基因細胞在培育具有耐堿性轉基因生物中的應用。

鞭毛運動蛋白在耐鹽堿植物培育等方面具有重要的應用潛力。通過克隆得到鞭毛運動蛋白基因，并通過轉基因的操作將微生物來源的鞭毛運動蛋白導入到植物細胞中，獲得耐鹽堿性提高的轉基因植株成為可能。

附圖說明

圖1顯示了重組載體pUC18-Aan10-mot導入的大腸桿菌K12(pUC18-Aan10-mot)的耐堿性的測定結果，其中，將重組載體pUC18-Aan10-mot導入的大腸桿菌K12(pUC18-Aan10-mot)分別接種到pH為8.0、8.5、9.0和9.5(含有50mM的CAPS、HEPES和TRICINE，5N?NaOH調節)的LB液體培養基中(100μg/ml氨芐青霉素)，培養12小時后測定OD₆₀₀，以導入pUC18空載體的大腸桿菌K12為對照(每組三個平行)。

圖2顯示了鞭毛運動蛋白缺失的大腸桿菌K12(Δmot)以及導入重組載體pUC18-Aan10-mot的K12(Δmot)(pUC18-Aan10-mot)耐堿性的測定結果，其中，將導入重組載體pUC18-Aan10-mot的K12(Δmot)(pUC18-Aan10-mot)和鞭毛運動蛋白缺失的大腸桿菌K12(Δmot)分別接種到pH為8.0、8.5、9.0和9.5(含有50mM的CAPS、HEPES和TRICINE，5N?NaOH調節)的LB液體培養基中，培養12小時后測定OD₆₀₀，以大腸桿菌K12為對照(每組三個平行)。

具體實施方式

以下本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。

本發明提供了一種鞭毛運動蛋白，其中，該鞭毛運動蛋白具有SEQ?ID?No：2所示的氨基酸序列，或者該鞭毛運動蛋白具有將SEQ?ID?No：2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加后仍具有鞭毛運動蛋白活性的氨基酸序列。優選地，所述鞭毛運動蛋白具有SEQ?ID?No：2所示的氨基酸序列。