[發(fā)明專利]一種新型糖化酶VGA及其基因和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110335511.5
• 申請日: 2011-10-28
• 公開（公告）號: CN102382807A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 羅長財;李陽源;鐘開新
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東溢多利生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/34
• 分類號: C12N9/34;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84
• 代理公司: 北京法思騰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇;楊小蓉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種新型糖化酶VGA及其基因和應(yīng)用。

背景技術(shù)

糖化酶是世界上產(chǎn)量最大、應(yīng)用范圍最廣的一種酶類，其應(yīng)用歷史悠久，我國早在1500年前即開始采用糖化曲釀酒。

糖化酶全稱為葡萄糖淀粉酶(GAcoamylase，EC3.2.1.3)，又稱γ-淀粉酶，簡稱糖化酶。糖化酶是可以淀粉、糊精等為底物，在一定條件下從淀粉的非還原性未端開始依次水解α-1，4葡萄糖苷鍵產(chǎn)生葡萄糖的淀粉葡萄糖甘酶。

糖化酶可應(yīng)用于酒精、釀酒、葡萄糖、果葡糖漿、抗菌素、乳酸、有機酸、味精、棉紡廠等各個行業(yè)，其應(yīng)用范圍極廣，對國民經(jīng)濟發(fā)展具有重大影響。

糖化酶的主要生產(chǎn)菌種為霉菌，我國多用紅曲霉、黑曲霉以及根霉，其中根霉以固體發(fā)酵為主，紅曲霉和黑曲霉多以深層液體發(fā)酵生產(chǎn)。

目前，對糖化酶特性方面的研究主要集中在熱穩(wěn)定性、pH作用范圍等方面。現(xiàn)在工業(yè)應(yīng)用的糖化酶其耐受溫度一般在85℃以下，超過該溫度則酶活損失巨大，甚至完全失活；另外，目前所生產(chǎn)及應(yīng)用糖化酶普遍pH作用范圍較窄，一般為4.5～6.5，這些均從一定程度上限制了糖化酶的應(yīng)用。

因此，有必要開發(fā)出一種新的糖化酶，在提高其產(chǎn)酶性能的同時，在一定程度上提高其耐熱性能及pH作用范圍。

本發(fā)明即是采用分子生物學(xué)技術(shù)，構(gòu)建出了一個高效糖化酶基因工程菌株，并利用該菌株進行糖化酶生產(chǎn)。本發(fā)明所提供的糖化酶基因，經(jīng)序列比對，為一種新型的糖化酶基因，該基因所表達的糖化酶，具有比活高、耐高溫、pH作用范圍廣等優(yōu)點，可以廣泛應(yīng)用于各種工業(yè)生產(chǎn)，具有良好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新型糖化酶VGA。

本發(fā)明的另一目的是提供編碼上述新型糖化酶的基因VGA。

本發(fā)明的另一目的是提供包含上述新型糖化酶基因VGA的重組載體。

本發(fā)明的另一目的是提供包含上述新型糖化酶基因VGA的重組菌株。

本發(fā)明的另一目的是提供制備上述新型糖化酶的方法。

本發(fā)明的另一目的是提供上述新型糖化酶的應(yīng)用。

本發(fā)明的一種生產(chǎn)上述新型糖化酶VGA的黑曲霉AN070902(Aspergillus?niger)，于2010年10月20日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，100101)，其保藏號為：CGMCC?No.4235，其相關(guān)信息記載于申請?zhí)枮镃N201010566249.0的專利申請中，已于2011年4月6日公開。

從上述菌株中分離得到一種糖化酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示：

MFSRLSLLRP?SLNEATVART?ISKRATLDSW?GLVCTGLANV?NAILNIGADG

AWVSGADSGI??????????????????????????????????????60

VVASSPTDNP?DYFYTWTRDS?FRNGSRPQDP?RRSRDTSLLS?IVQGISNPSG

TIENYISAQA?????????????????????????????????????120

DLSSGAGLGE?PKFNVDETAY?STGWRGPRQD?AGPLARTAMI?GGFQLWLGDN

STYTTADWIV?????????????????????????????????????180

LVPNDRSYVL?YAQWQNTDGY?TFIAQVHLRA?WELEGVNSSF?RVDSAAFVTA

SSGSWCCDSQ?????????????????????????????????????240

TGFWFSINLA?PEAIYLCLQS?SFDSGRSDKA?TNLGSLIHTF?PFQSCPRAAL

EDPADACDST?????????????????????????????????????300

LFILNDTLGS?HNKVVEDRSS?FWLCATLAAE?EPDTYYNGNP?EDSVAAVGRY

YQLDLAYWQD?????????????????????????????????????360

GKQSELVVTD?DSLFKFALYS?SSTYISSAVD?VIEHATASNG?KVTADFGSFV