[發(fā)明專利]一種櫛孔扇貝熱休克蛋白基因啟動子

有效

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• 申請日: 2011-10-23
• 公開（公告）號: CN102757963A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 相建海;趙翠;郇聘;張曉軍;李富花
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種櫛孔扇貝熱休克蛋白基因啟動子。

背景技術(shù)

櫛孔扇貝是我國重要的海水養(yǎng)殖種類，在我國北方有廣大的養(yǎng)殖面積，具有重要的經(jīng)濟意義。當前，櫛孔扇貝的養(yǎng)殖業(yè)存在著種質(zhì)退化、病害頻發(fā)的難題，嚴重制約了我國櫛孔扇貝養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展(張福綏，楊紅生.櫛孔扇貝大規(guī)模死亡問題的對策及應(yīng)急措施.海洋科學，1999，2：1-5.)。

轉(zhuǎn)基因是物種種質(zhì)改良的重要手段，其一般指將人工構(gòu)建的基因功能元件導(dǎo)入到生物體基因組中，達到改變生物體的性狀的目的。當前，轉(zhuǎn)基因技術(shù)在經(jīng)濟動植物的性狀改良中表現(xiàn)出了巨大的潛在應(yīng)用價值，如轉(zhuǎn)抗病害基因農(nóng)作物，轉(zhuǎn)生長因子鮭魚以及可以在乳腺中分泌藥物的轉(zhuǎn)基因動物(生物反應(yīng)器)等。轉(zhuǎn)基因技術(shù)在櫛孔扇貝中也有著廣闊的應(yīng)用前景，如將抗病基因?qū)肷蓉愔校a(chǎn)生抗病品系，將有可能從根本上解決當前扇貝養(yǎng)殖業(yè)中夏季病害頻發(fā)的頑疾；將生長因子類的基因?qū)肷蓉愔校邢Ｍ嘤龈弋a(chǎn)、低生長周期的品系，縮小養(yǎng)殖成本，增加養(yǎng)殖效益。

當前，在櫛孔扇貝中尚無轉(zhuǎn)基因的應(yīng)用。除導(dǎo)入及整合方法的限制外，可用基因元件(包括扇貝源啟動子和功能基因)的缺乏也是重要的限制因素之一。啟動子是人工構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體的不可或缺的重要組成成份，它決定了所轉(zhuǎn)入的基因的表達情況，如表達時間、部位、強度等等。熱休克蛋白HSP70是一種重要的生物活性蛋白，參與了生物體內(nèi)眾多的生理過程。Hsp70基因表達的一個重要特征是呈誘導(dǎo)型表達，在高溫或病原刺激下有明顯的上調(diào)表達；而這種表達特征主要取決于hsp70基因的啟動子組成。將hsp70基因的啟動子元件應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因研究中，可以通過控制溫度的高低方便地改變導(dǎo)入基因的表達時機和表達量，使生物體的性狀按照人類的意志進行改變，有重要的應(yīng)用價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種櫛孔扇貝熱休克蛋白基因啟動子。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種櫛孔扇貝熱休克蛋白基因啟動子：櫛孔扇貝熱休克蛋白基因啟動子為下述任一項：

(1)櫛孔扇貝熱休克蛋白基因啟動子為序列表中SEQ?ID?NO.1堿基序列；

(2)與序列表中SEQ?ID?NO.1限定的DNA序列具有80％以上同源性的DNA序列；

(3)是序列表中SEQ?ID?NO.1的片段、遺傳變體或缺失體，且能控制下游基因轉(zhuǎn)錄的DNA分子。

所述啟動子作為啟動海洋生物組織特異性地表達目標基因的啟動子的用途。

所述啟動子與與之進行可操作的有效基因連接，而后插入載體中構(gòu)成表達載體。所述有效基因如免疫相關(guān)基因LGBP、hsp70、lectin、toll等，生長相關(guān)基因如myostatin、actin、tubulin、EGF等，其它重要生理基因如vasa、SOX、BMP、NOTCH等；載體為表達載體如pCMVp-NEO-BAN、pEGFP、pEGFT-Actin、pSV2、CMV4等。。

而后以可表達的方式將有效基因與所述的啟動子連接，得重組片段；將上述重組片段插入載體中；用該載體轉(zhuǎn)化宿主細胞，培養(yǎng)該細胞表達有效基因。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點：

1.本發(fā)明獲得櫛孔扇貝熱休克蛋白基因啟動子，其采用BAC克隆全測序及啟動子預(yù)測方法，比傳統(tǒng)的染色體步移方法更簡單快捷。

2.本發(fā)明將櫛孔扇貝熱休克蛋白基因啟動子用于轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建的優(yōu)勢在于：

(1)熱休克蛋白hsp70是一種誘導(dǎo)表達的基因，其基因啟動子在熱刺激后表現(xiàn)出高表達現(xiàn)象。相比于一些持續(xù)性表達的載體，其在表達某些對扇貝有害的基因時就體現(xiàn)出較強的優(yōu)勢，如caspase基因，可以誘導(dǎo)其在特殊時期表達，避免持續(xù)表達導(dǎo)致機體傷亡。另外，熱休克蛋白參與了扇貝體內(nèi)多種生理過程，必定為一個高效表達的調(diào)控元件；用熱休克蛋白基因啟動子構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體，所攜帶的外源基因表達效率很可能會大大提高。

(2)在扇貝轉(zhuǎn)基因?qū)嶒炛惺褂蒙蓉愖陨韱幼樱粫氩《镜绕渌锏暮怂嵝蛄校哂懈叩纳锇踩裕欣趯磙D(zhuǎn)基因扇貝進入市場。

3.本發(fā)明使用EGFP基因為報告基因構(gòu)建轉(zhuǎn)基因載體的優(yōu)點在于EGFP是加強型綠色熒光蛋白，容易觀察和檢測，能極大地提高轉(zhuǎn)基因動物的篩選效率，有利于扇貝轉(zhuǎn)基因技術(shù)的建立。

附圖說明