[發(fā)明專利]抑制手足口病病毒基因的干擾RNA, 包含其的載體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110333378.X
• 申請(qǐng)日: 2011-10-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102399780A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-04-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊倬;田波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/11;C12N15/63;A61K48/00;A61P31/14
• 代理公司: 北京市漢信律師事務(wù)所 11373
• 代理人: 王文生

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及針對(duì)引起手足口病的兩種主要病原體腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16基因組的干擾RNA，包含所述干擾RNA的載體，由所述載體轉(zhuǎn)錄的干擾RNA及其在制備用于預(yù)防或治療手足口病的藥物中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

手足口病(Hand?foot?mouth?disease，HFMD)是嬰幼兒常見(jiàn)的傳染病，由腸道病毒引起，臨床上以發(fā)熱和手、足、口腔等部位出現(xiàn)皮疹、潰瘍等表現(xiàn)為主，個(gè)別患者可引起心肌炎、肺水腫、無(wú)菌性腦膜腦炎等致命性并發(fā)癥。手足口病是全球性傳染病，世界大部分地區(qū)包括中國(guó)的多個(gè)省份均有此病流行的報(bào)導(dǎo)，已引起了全世界的普遍關(guān)注。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種，其中柯薩奇病毒A16型(Cox?A16)和腸道病毒71型(EV?71)最常見(jiàn)，成為手足口病的主要病原體(Li?et?al.，2004)。由于目前尚無(wú)公認(rèn)的十分有效的針對(duì)手足口病主要病毒腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16基因的疫苗，因此研發(fā)能有效地針對(duì)手足口病的預(yù)防或治療手段是十分急迫的。?

RNA干擾(RNA?interference，RNAi)是一種序列特異的雙鏈RNA(double-stranded?RNA，dsRNA)分子，在mRNA水平關(guān)閉相應(yīng)序列基因的表達(dá)或使其沉默。隨著研究的進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象具有重要的生物學(xué)功能，如RNA干擾可產(chǎn)生類似于基因敲除的表型，使其作為一種工具，對(duì)基因的功能進(jìn)行研究；并且越來(lái)越多的文獻(xiàn)報(bào)道RNA干擾可以用來(lái)作為清除病毒的一種手段，以此作為基因治療的方式。例如人類免疫缺陷病毒、乙肝病毒、流感病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒等(Gao?et?al.，2006；Gitlin?et?al.，2002；Haasnoot?et?al.，2007；Liu?et?al.，2007；Ying?et?al.，2007)。?

本發(fā)明的發(fā)明人設(shè)計(jì)了針對(duì)引起手足口病的兩種主要病原體腸道病?毒71型和柯薩奇病毒A16基因組的干擾RNA序列，并將其編碼DNA序列構(gòu)建到小環(huán)DNA載體中，申請(qǐng)人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，本發(fā)明設(shè)計(jì)的干擾RNA序列以及包含其的載體可以同時(shí)有效地抑制腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16基因的表達(dá)，從而顯著抑制了病毒的復(fù)制水平。本發(fā)明的小環(huán)DNA載體僅由外源基因的表達(dá)盒構(gòu)成，不含有來(lái)自細(xì)菌質(zhì)粒的骨架結(jié)構(gòu)，從而減少了未甲基化的CpG所致的炎性反應(yīng)，提高了安全性；而堿基數(shù)的減小，更有效的提高了目的基因的表達(dá)和生物利用度。小環(huán)DNA載體克服了傳統(tǒng)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染率低、易引起免疫反應(yīng)及外源基因在體內(nèi)表達(dá)時(shí)間短的缺點(diǎn)，是一種安全、高效的新型載體。因此所構(gòu)建的小環(huán)DNA載體轉(zhuǎn)錄的干擾RNA不僅相比于化學(xué)合成的干擾RNA靶向性更好，特異性更強(qiáng)，具有更好的穩(wěn)定性，能夠克服化學(xué)合成干擾RNA的不穩(wěn)定，藥物作用持續(xù)時(shí)間短，吸收量少的特點(diǎn)，而且相比于病毒載體具有更好的安全性，作用效果穩(wěn)定，藥物作用持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，可以多次免疫的優(yōu)點(diǎn)。?

參考文獻(xiàn)?

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