[發明專利]一種二十碳五烯酸生產菌株的篩選方法

無效

• 申請號: 201110332984.X
• 申請日: 2011-10-28
• 公開（公告）號: CN102358886A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 盧美歡;李利軍;馬英輝
• 申請（專利權）人: 陜西省微生物研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 中國科學院西安專利中心 61001
• 代理人: 任越

1.一種二十碳五烯酸生產菌株的篩選方法，其特征在于，具體包括：

步驟一、誘導培養：將采集的土樣置于無菌培養皿內，噴適量無菌水 保持濕度，將經滅菌的誘物塊按每皿1～5塊均勻放置在培養皿內的土樣上， 使誘物部分埋于土內，培養見誘物上有菌絲長出，將菌絲移植到含硫酸鏈 霉素600單位/ml和青霉素鈉鹽1000單位/ml的PDA培養基平板上25℃培養2 天；所述土樣采集于菜園或果園5～15cm深處；所述的誘物塊為1公分大小 的黃瓜、土豆、黃豆、花生和胡蘿卜塊的任一種或是幾種；

步驟二、分離純化：采用稀釋涂布法對培養菌體進行分離純化，直至得 到純菌株，將得到的菌株采用PDA培養基斜面保種，編號保存；

步驟三、初步篩選：將純化菌株從斜面中挑取菌絲于試管中，加入蘇丹 II與蘇丹IV混合液染色5分鐘，用水沖洗后取染色的菌絲置于載波片上顯微 鏡觀察；選取脂肪粒大而多的菌株為初篩菌種并確定其編號；

步驟四、復篩：將初篩菌種采用PDA固體培養基擴大培養，得到的孢子 采用液體培養基再次擴大培養；收獲菌絲烘干后研磨，用石油醚提取油脂， 經甲酯化后進行氣相色譜分析，選取EPA含量高的菌株確定編號，完成EPA高 產菌株的篩選。

2.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，步驟四中所述液體培 養基的組成為：葡萄糖50g/L，酵母膏5g/L，硝酸鈉3g/L，磷酸氫二鈉1g/L， 硫酸鎂0.5g/L。