[發明專利]表達BDNF-HA2TAT的重組腺相關病毒在制備治療抑郁癥疾病藥物中的應用

無效

• 申請號: 201110332238.0
• 申請日: 2011-10-28
• 公開（公告）號: CN102366631A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: 馬現倉;高成閣;黨永輝;楊廣笑;亢萬虎;伏煒;王崴;李雅妹;馬明芳
• 申請（專利權）人: 西安交通大學醫學院第一附屬醫院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K35/76;C12N15/35;C12N15/864;A61P25/24
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 金重慶

技術領域

本發明涉及一種重組載體的應用，具體地說，是一種表達BDNF-HA₂TAT的重組腺相關病毒在制備治療抑郁癥疾病藥物中的應用。

背景技術

抑郁障礙存在海馬神經元萎縮、細胞凋亡加速、神經元再生障礙等神經病理學改變。如何有效的保護海馬神經元一直是抑郁障礙研究的熱點和難點。腦源性神經營養因子(brain?derived?neurotrophic?factor，BDNF)是神經營養因子家族中的重要成員，BDNF表達下調可能參與慢性應激所致抑郁癥海馬結構和功能的改變。將外源性?BDNF注入強迫游泳和學習無助的抑郁大鼠模型的海馬齒狀回可以產生抗抑郁樣活性，這說明BDNF中樞給藥對于抑郁癥來說是有效的。然而BDNF抗抑郁作用的發揮一方面有賴于其有效的中樞血藥濃度，另一方面中樞多次給藥以及輸注設備持久存在會引起神經組織的額外損傷。盡管外周靜脈內給藥簡便、無損傷，但由于BDNF在血液循環中存在降解和血腦屏障的通透性問題，以致很難到達中樞神經的保護效應。

腺相關病毒(adeno-associated?virus，AAV)是目前發現的唯一無致病性的單鏈DNA病毒,?也是已知的唯一能與人基因組特異染色體定點整合的天然復制缺陷病毒。它無明顯的致病性，無免疫源性及炎癥反應；不能獨立復制，在無輔助病毒(如腺病毒、皰疹病毒)感染時，AAV只能整合在宿主細胞的DNA中，呈潛伏感染狀態，插入的外源基因表達時間長，轉移外源基因時不伴隨任何病毒基因的表達。AAV以點特異方式固定地整合在人19號染色體上，不存在致癌及插入突變；宿主范圍廣，不僅可感染分裂期細胞，對非分裂期細胞(如神經元、肌細胞等)也較敏感。基于以上特點而開發的腺相關病毒載體是繼腺病毒和逆轉錄病毒后出現的新型基因治療工具。如果將BDNF基因序列導入AAV載體，則可以持續分泌表達BDNF。

近年來，經鼻入腦的給藥方式為國內外中樞神經系統給藥方式研究的熱點，這種給藥方式既可以避免腹腔或靜脈注射途徑中需經血液循環入腦而引起的全身副作用，又可以避免在血液循環中降解過快，并且有著腦內藥物濃度高的優點。以往的研究發現脂溶性好的小分子物質（小于10kD）可以沿“鼻-腦”通路入腦，但大分子蛋白難以沿此通路入腦。由于在基因治療中對神經系統有治療作用的基因產物多為大分子蛋白，因此，尋求將大分子蛋白經“鼻-腦”通路導入腦內的方法，將為解決基因治療的難題提供一種新的思路和方法。穿膜肽為近年來新發現的一種具有蛋白轉導功能的短肽，研究發現它的蛋白轉導機制為新的非能量、非受體、非溫度依賴的轉導方法，常用的穿膜肽有果蠅的Ant蛋白、TAT蛋白和人工合成的多聚精氨酸等。Murriel等通過腹腔注射穿膜肽2B2半乳糖苷酶，發現穿膜肽能攜帶該蛋白通過血腦屏障到達腦組織，同時能保持酶的活性，且在該過程中對神經細胞及血腦屏障的免疫反應很弱。上述實驗均顯示穿膜肽能夠攜帶蛋白質透過血腦屏障并保持蛋白的活性，同時對神經細胞、血腦屏障的免疫性很弱。