[發明專利]一種快速分離脂肪間充質干細胞的試劑盒及方法無效
| 申請號： | 201110330948.X | 申請日： | 2011-10-27 |
| 公開（公告）號： | CN103087982A | 公開（公告）日： | 2013-05-08 |
| 發明（設計）人： | 田杰 | 申請（專利權）人： | 北京清美聯創干細胞科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100097 北京市海淀區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 分離 脂肪 間充質 干細胞 試劑盒 方法 | ||
1.一種分離脂肪間充質干細胞的試劑盒，包括：
洗滌液，其為含0.9％的氯化鈉的生理鹽水；
培養液A，其為含100ng/ml?LIF與100ng/ml?bFGF細胞因子的Knockout-DMEM液體培養基；
培養液B，其為胎牛血清；
細胞消化液，其為膠原酶I型酶液。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述洗滌液、培養液A、培養液B以及細胞消化液是無菌的。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述洗滌液、培養液A、培養液B以及細胞消化液是獨立包裝。
4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述脂肪間充質干細胞源自哺乳動物。
5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述培養液B的技術指標如下：pH(7.0-7.5)、總蛋白含量(3-3.5/100ml)、血紅蛋白(≤20mg/100ml)。
6.權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述培養液A與培養液B以4∶1的體積比來提供。
7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述生理鹽水為含0.9％的氯化鈉溶液，所述細胞消化液為質量/體積百分比濃度0.2％的膠原酶I型酶液。
8.一種分離脂肪間充質干細胞的力法，包括：
(1)利用洗滌液沖洗脂肪中中的血污，用解剖刀在脂肪一端(離頂端1cm處)圓周劃開外表皮，用夾子固定脂肪此端，用兩把鑷子用力撕下脂肪外表皮，再分離兩根動脈，最后將靜脈內皮剔除；
(2)將剩余脂肪組織剪碎成肉糜狀，轉移到離心管中，隨后用細胞消化液消化(37℃消化6小時)；
(3)吸出離心管中消化后的液體。除去其他組織及雜質。
(4)吸出的液體經離心機離心(2500rpm，5分鐘)。離心后，倒出培養基，用細胞培養液重懸細胞。
(5)接種的原代細胞于0.2％明膠包被的培養瓶中，置37℃、5％CO2培養箱中培養。
其中洗滌液為生理鹽水；
細胞培養混合液為按照9∶1體積比來配制的培養液A與培養液B，其中培養液A為Knockout-DMEM液體培養基，培養液B為胎牛血清；
以及細胞消化液膠原酶I型酶液。
(6)每天觀察細胞貼壁生長情況。細胞多數貼壁后全量換液，除去未貼壁細胞和雜?質，以后每3～4天半量換細胞培養液。
9.根據權利要求8所述的方法，其中在步驟(5)中，采用每106個細胞接種到25m2培養瓶中。
10.根據權利要求8所述的方法，其中在步驟(6)中，24小時細胞多數貼壁后全量換液，除去未貼壁細胞和雜質，。?
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