[發明專利]一種測定板藍根及其制劑的高效液相色譜特征指紋圖譜的方法

無效

• 申請號: 201110330388.8
• 申請日: 2011-10-26
• 公開（公告）號: CN102507832A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 王瑞;石燕紅;王崢濤;李醫明;黃山君;謝智勇
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙) 31258
• 代理人: 何葆芳

技術領域

本發明是涉及一種測定板藍根及其制劑的高效液相色譜特征指紋圖譜的方法，屬于中藥分析技術領域。

背景技術

中藥板藍根，又稱北板藍根，自首載于《中國藥典》1977年版，此后歷版藥典均有收載，為十字花科植物菘藍Isatis?indigotica?Fort.的干燥根，具有清熱解毒、涼血利咽之功效。十字花科植物中富含芥子苷類化合物，板藍根中含有的主要芥子苷類化合物為R，S-告依春、原告依春、表原告依等，其中R，S-告依春為板藍根的主要活性成分之一，且為板藍根的特征性成分。目前對板藍根的質量主要是根據R，S-告依春含量高低進行控制(2010版《中國藥典》(一部)，國家醫藥科技出版社：191)。

南板藍根為爵床科植物馬蘭Baphicacanthus?eusia(Nees)Bremek.干燥根(2010版《中國藥典》(一部)，國家醫藥科技出版社：229)。自《中國藥典》1995年版將南板藍根單列品種開始，便有北板藍根、南板藍根兩種。南板藍根中不含有R，S-告依春等芥子苷類化合物，不作為板藍根使用，但目前市場上仍有南、北板藍根混用的現象。

板藍根顆粒和復方板籃根顆粒為常用的非處方藥品，是以板藍根為原料的最具代表性的制劑。板藍根顆粒是由板藍根經水煎醇沉加工制成，復方板藍根顆粒是由板藍根和大青葉經水煎醇沉加工制成，均具有清熱解毒、涼血利咽、消腫之功效。但迄今為止，板藍根顆粒以亮氨酸、精氨酸對照品作為TLC鑒別依據，無含量測定項(2010版《中國藥典》(一部)，國家醫藥科技出版社：800)；復方板藍根顆粒以氨基酸為對照進行TLC鑒別，以靛玉紅、靛藍為指標成分進行定量控制。上述質量控制方法缺乏專屬性，且與現行板藍根藥材和飲片的標準不一致，無法保證板藍根制劑的質量。

目前對板藍根及其制劑的指紋圖譜已有文獻報道(參見閆峻等，復方板藍根顆粒抗病毒成分HPLC-UV指紋圖譜及LC-ESI-MSⁿ研究[J]，化學學報，2011年，69(2)：204；肖雪等，中藥板藍根高效液相色譜法指紋圖譜研究[J]，江西中醫學院學報，2010年，22(3)：67；柏健等，板藍根顆粒的HPLC指紋圖譜研究[J]，中草藥，2006年，37(1)：72)，但這些方法均為獨立的指紋圖譜研究方法，無法體現板藍根藥材與制劑的相關性，且不能與南板藍根相區別。目前尚無在同一高效液相色譜條件下針對板藍根、板藍根顆粒、復方板藍根顆粒和南板藍根進行指紋圖譜研究的方法。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供一種測定板藍根及其制劑的高效液相色譜特征指紋圖譜的方法。

本發明提供的測定板藍根及其制劑的高效液相色譜特征指紋圖譜的方法，包括如下步驟：

a)對待測的板藍根及其制劑樣品進行預處理：向待測樣品中加入水，加熱，搖勻，濾過，取續濾液；

b)采用高效液相色譜法，測定經預處理后的待測的板藍根及其制劑樣品，獲得特征指紋圖譜；所述的高效液相色譜法的色譜條件是采用反相十八烷基鍵合相硅膠色譜柱，流動相由A相和B相組成，A相為pH＝3.0、0.02％的磷酸水溶液，B相為乙腈，按照以下條件進行梯度洗脫：

0至10分鐘，流動相A與流動相B的體積比由99∶1勻速變化至95∶5；

10至15分鐘，流動相A與流動相B的體積比由95∶5勻速變化至93∶7；

15至30分鐘，流動相A與流動相B的體積比為93∶7。

所述的待測的板藍根樣品是指板藍根藥材和板藍根飲片，包括南板藍根藥材；待測的板藍根制劑樣品是指板藍根顆粒和復方板藍根顆粒，包括含蔗糖型和無蔗糖型。

進一步，待測的板藍根樣品的預處理方法如下：精密稱取待測樣品粉末，精密加入50倍重量的水，稱重，煎煮2小時，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

進一步，待測的板藍根制劑樣品的預處理方法如下：取制劑待測樣品，研細，混勻，精密稱取，加入含蔗糖制劑樣品的10倍重量的水，或加入無蔗糖制劑樣品的20倍重量的水，水浴加熱并振搖使其溶解，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

進一步，所述的高效液相色譜方法采用紫外檢測器，采集范圍為190～400nm，檢測波長為245nm；反相十八烷基鍵合相硅膠色譜柱為Shiseido?C₁₈MG(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱；混合流動相的流速為1.0mL/min；進樣量為10μl；柱溫為30℃。