[發(fā)明專利]糖鏈衍生物的制造方法、結(jié)構(gòu)解析方法、以及糖鏈衍生物

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110329125.5
• 申請(qǐng)日: 2006-07-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102516402A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 掛樋一晃;木下充弘;松野裕樹(shù)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大塚化學(xué)株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 于巧玲

本申請(qǐng)是中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01010266780.6，申請(qǐng)日2006年7月19日，發(fā)明名稱“糖鏈衍生物的制造方法、結(jié)構(gòu)解析方法、以及糖鏈衍生物”的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及來(lái)自糖鏈的混合物的糖鏈衍生物的制造方法、以及糖鏈的結(jié)構(gòu)解析方法。進(jìn)一步，涉及根據(jù)本發(fā)明的糖鏈衍生物的制造方法制造的新的糖鏈衍生物。

背景技術(shù)

糖蛋白質(zhì)中的糖鏈認(rèn)為具有保持蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)、獲得防止被蛋白酶的分解的抵抗性等作用。最近，逐漸地闡明了糖蛋白質(zhì)中的糖鏈參與受精和分化、信號(hào)傳導(dǎo)、癌化、蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)輸送和生理活性的調(diào)節(jié)等的生命現(xiàn)象。另外，還闡明了細(xì)胞表面的粘接分子和糖蛋白質(zhì)性激素等的糖鏈與其功能的關(guān)系，總結(jié)了糖質(zhì)科學(xué)公會(huì)(consortium)構(gòu)想。現(xiàn)在，糖鏈功能研究的中心研究以影響其的生合成糖轉(zhuǎn)移酶(糖鏈基因)為中心，如果考慮糖轉(zhuǎn)移酶還根據(jù)基因組情報(bào)被保存，利用與其他蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)作業(yè)，參與生命功能，還需要利用捕捉細(xì)胞、組織中表達(dá)的糖鏈的整體圖像進(jìn)行解析的結(jié)構(gòu)糖組學(xué)(glyconomics)手法，進(jìn)行糖鏈的功能解析。

糖鏈科學(xué)中的結(jié)構(gòu)糖組學(xué)的作用是綜合地解析在多數(shù)生命現(xiàn)象中擔(dān)負(fù)重要作用的糖鏈識(shí)別機(jī)理，對(duì)功能糖組學(xué)是不可缺少的要素。作為結(jié)構(gòu)糖組學(xué)所要求的技術(shù)的要素，有高綜合性、高生產(chǎn)量、高感度以及高精度。

現(xiàn)在，作為糖蛋白質(zhì)糖鏈的結(jié)構(gòu)解析法，對(duì)從蛋白質(zhì)切出的糖鏈進(jìn)行熒光標(biāo)記后，利用高效液相色譜(HPLC)或者質(zhì)譜分析法(MS)的解析的方法成為利用質(zhì)譜分析的快速技術(shù)進(jìn)步的有力的手段(非專利文獻(xiàn)1～4)，唾液酸糖鏈的分離中，逐漸地專門地利用陰離子交換色譜色譜(非專利文獻(xiàn)5)。

【非專利文獻(xiàn)1】Biomed?Chromatogr.16：103-115(2002)

【非專利文獻(xiàn)2】Anal?Biochem.206：278-287(1992)

【非專利文獻(xiàn)3】Biochem?Soc?Trans.21：121-125(1993)

【非專利文獻(xiàn)4】Chem?Rev.102：321-369(2002)

【非專利文獻(xiàn)5】Biochim?Biophys?Acta.705：167-173(1982)

但是，對(duì)細(xì)胞或組織中的糖鏈綜合解析的場(chǎng)合，由于存在唾液酸和巖藻糖等的非還原末端修飾的多樣性和糖鏈的分枝這樣的問(wèn)題，不能充分地分離混合存在的糖鏈，不能得到滿意的結(jié)果。特別地，如果使用離子交換色譜等，由于沒(méi)有特異的分離能力，不僅不能獲得充分的分離，而且分離操作后必須要進(jìn)行脫鹽處理，可以說(shuō)并不是實(shí)用的方法。

因此，對(duì)這些的糖鏈不均一性情報(bào)有擔(dān)心，同時(shí)迫切希望對(duì)細(xì)胞、組織可以詳細(xì)進(jìn)行特征糖鏈結(jié)構(gòu)解析的實(shí)用的手法。

本發(fā)明的課題在于，提供從像細(xì)胞或者組織中的糖鏈那樣混合存在的各種的糖鏈的狀態(tài)分離、獲取各糖鏈的手段。

另外，本發(fā)明課題在于，提供對(duì)于分離的各糖鏈化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析的手段。

進(jìn)一步，本發(fā)明的課題在于提供新的糖鏈衍生物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及以下的發(fā)明。

1.糖鏈衍生物的制造方法，是從糖鏈混合物制造糖鏈衍生物的方法，其特征在于，包括下述工序：(a)在糖鏈混合物中的糖鏈上導(dǎo)入脂溶性基，得到糖鏈衍生物的混合物的工序、以及(b)將該糖鏈衍生物的混合物用5-羥色胺(serotonin)親合柱色譜法進(jìn)行處理的工序。

2.上述1記載的糖鏈衍生物的制造方法，其中在(b)工序之后具備(c)采用氨基柱或者酰氨基柱的正相色譜法進(jìn)行處理的工序。

3.上述記載的糖鏈衍生物的制造方法，其中，在(c)工序之前，具備(d)用糖水解酶進(jìn)行處理的工序。

4.糖鏈的結(jié)構(gòu)解析方法，是解析糖鏈混合物中的糖鏈的結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于，具備以下工序：(a)在糖鏈混合物中的糖鏈上導(dǎo)入脂溶性基，得到糖鏈衍生物的混合物的工序、(b)將該糖鏈衍生物的混合物用5-羥色胺親合柱色譜法進(jìn)行處理的工序、以及(e)用質(zhì)譜分析法進(jìn)行處理的工序。

5.上述記載的糖鏈的結(jié)構(gòu)解析方法，其特征在于，在(b)工序之后，具備(c)通過(guò)采用氨基柱或者酰氨基柱的正相色譜法進(jìn)行處理的工序。

6.上述記載的糖鏈的結(jié)構(gòu)解析方法，其中，在(c)工序之前具備(d)用糖水解酶進(jìn)行處理的工序。

7.上述4記載的糖鏈的結(jié)構(gòu)解析方法，其中，質(zhì)譜分析法是利用MALDI-TOF?MS的質(zhì)譜分析法。