[發明專利]海地瓜消化道總RNA快速提取方法

無效

• 申請號: 201110328834.1
• 申請日: 2011-10-26
• 公開（公告）號: CN102344923A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 王天明;邵慶均;劉永芹;肖金星;鄭剛;馬文明
• 申請（專利權）人: 浙江大學舟山海洋研究中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.海地瓜消化道總RNA快速提取方法，其特征在于該方法的具體步驟是：

步驟(1).解剖取海地瓜消化道，使用針頭縱向剖開消化道管，采用經膜過濾及高溫滅菌的海水清洗后用液氮冷凍；

步驟(2).將冷凍后的海地瓜消化道研磨成粉末，取30～50mg粉末加入到液氮預冷的離心管中；

步驟(3).離心管中加入0.8～1.2ml的TRIZOL裂解液，振蕩混勻，常溫下靜置5～10min，離心0.5～2min；

步驟(4).取上清液，加入200～300μl氯仿，振蕩混勻5～10min，靜置5～10min后離心10～20min?，取上層水相200～300μl；

步驟(5).取出的上層水相中加入與上層水相等體積的經過-30～-10℃預冷的異丙醇，混勻后-30～-10℃下靜置10～20min，離心5～15min，沉淀RNA；

步驟(6).將離心管置于冰盒中，去除上清后加入1～2ml經-30～-10℃預冷的濃度為75%乙醇進行清洗；

步驟(7).吹洗沉淀后，重復步驟(6)；

步驟(8).去除上清后離心1～2min，移液槍吸除剩余液體，加入20～40μl的無RNA酶去離子水，混勻后在3～5℃下放置10～20min，溶解RNA；

步驟(9).獲得的RNA溶液中加入4～5μl的無RNA酶的DNA酶緩沖液、8～10μl濃度為1U/μl的無RNA酶的DNA酶及1～2μl的RNA酶抑制劑，混勻后30～40℃恒溫培育30～60min，成培養液；

步驟(10).培養液中加入與培養液等體積的經過-30～-10℃預冷的異丙醇，混勻后-30～-10℃下靜置10～20min，離心5～15min，再次沉淀RNA；

步驟(11).再次將離心管置于冰盒中，去除上清后加入1～2ml經-30～-10℃預冷的濃度為75%乙醇進行清洗；

步驟(12).吹洗沉淀后，重復步驟(11)；

步驟(13).去除上清后離心1～2min，移液槍吸除剩余液體，加入20～40μl的無RNA酶去離子水，混勻后在3～5℃下放置20～40min，再次溶解RNA；

步驟(14).取1～3μlRNA溶液用于凝膠檢測和濃度檢測，其余置于-90～-70℃保存。

2.如權利要求1所述的海地瓜消化道總RNA快速提取方法，其特征在于：所述離心的條件為3～5℃，離心速度為8000～15000×g。