[發明專利]一種西藏琵蝎抗單純皰疹病毒活性多肽及其用途

無效

• 申請號: 201110328412.4
• 申請日: 2011-10-26
• 公開（公告）號: CN102382839A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 李文鑫;曹志賤;吳英亮
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K7/08;A61K38/10;A61K9/00;A61K47/38;A61P31/22
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 汪俊鋒

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及西藏琵蝎抗單純皰疹病毒活性多肽。本發明還涉及了一種治療治療單純皰疹、口唇皰疹、生殖器皰疹、帶狀皰疹外用凝膠。

背景技術

單純皰疹病毒(HSV)是一種常見的人類傳染病病毒，主要感染口、眼、唇的皮膚和粘膜、中樞神經系統、生殖器、內臟器官等，引起口唇皰疹、腦炎、角膜結膜炎、生殖器皰疹等疾病。皰疹的治療手段多為外用藥，內服藥，或內服藥與外用藥結合，亦采用物理方法治療，但總體上治療效果不理想，用后不良反應較多。

目前皰疹主要采用抗病毒藥物治療。如阿昔洛韋(ACV)是一種開鏈嘌呤核苷，能抑制病毒脫氧核糖核酸合成，而對宿主細胞DNA的合成作用較少。被認為是目前最有效的抗HSV藥物。病情嚴重者可靜脈給藥。能使病毒迅速減少，癥狀減輕，愈合時間縮短。外用3％-5％ACV軟膏也能減輕癥狀和縮短病程。對復發次數較為頻繁的患者，可預防性的服藥。近年來新開發出無環鳥苷的類似物，如萬乃洛韋(valaciclovir)、法昔洛韋(famicidovir)、潘昔洛韋(pencidovir)等，具有療效確切、生物利用度高等優點。另外，三氮唑核苷是一種鳥嘌呤核苷的類似物，有抗DNA和RNA病毒的作用，口服能減輕疼痛和縮短病程。

但這些抗病毒藥物的使用產生病毒的耐藥性，當前許多治療皰疹藥物大部分療效不佳是由于耐藥病毒株感染所導致。陽離子防御肽是一類由宿主生成，并且在天然免疫中特異性發揮防御性作用的一類小肽。這一類小分子多肽通常由10-50個氨基酸構成，靜電荷從+2到+9不等，在生物體抵御微生物的入侵中發揮重要的作用。根據結構的差別，陽離子防御肽可以分為如下幾類：含有2-4個β片層的兩親性分子、兩親性α螺旋、卷曲結構、以及含有高級結構的分子。陽離子防御肽在體內對細菌、真菌、寄生蟲、以及病毒的侵染均有有效的抵御作用。研究表明，蜂毒溶血肽Melitiin和天蠶素Cecropins在亞毒性濃度下通過阻遏基因表達來抑制HIV-1病毒的增殖，爪蟾抗病毒多肽Magainin-2對皰疹病毒HSV和HSV-2有一定的抑制效果，這些多肽都是α螺旋類陽離子防御肽。目前的研究表明，α螺旋類陽離子防御肽特異性作用于有包膜的RNA病毒及DNA病毒，其作用方式通常是作用于病毒進入的過程，或者是直接作用于病毒的包膜。例如，Dermaseptin就是通過作用于HIV的包膜而引起HIV的失活，從而達到抗病毒的作用。所以，陽離子防御肽不再是傳統的疫苗防治，而是通過直接抑制病毒達到抗病毒的目的。蝎子中陽離子防御肽的研究也已經有多年的歷史。其中除了從淋巴系統中發現的防御肽外，更多的是從蝎毒腺中分離到的防御肽，例如Hadrurin，Scorpine，Opistoporin，Parabutoporin，ISCT，Pandinin。

這些被稱為多肽的生物活性物質，因為具有純生物物質、穩定性強、殺病毒強、廣譜、無抗藥耐藥性、無毒副作用和“三致”作用特點。AHSVP1是從西藏琵蝎獲得的一個天然抗病毒分子，由于產生機制、抗病毒機制和作用方式與傳統抗病毒藥物不同，可很快殺滅病毒而自身不產生耐藥性，且肽水解后的氨基酸有利于皮膚組織的生成。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供蝎源抗單純皰疹病毒活性高的陽離子多肽及其治療單純皰疹、口唇皰疹、生殖器皰疹、帶狀皰疹的外用凝膠制劑。

為了實現上述目的，首先構建高質量西藏琵蝎毒腺組織cDNA文庫，具體包括蝎毒腺總RNA的分離和mRNA純化，cDNA的第一鏈和第二鏈合成，雙鏈cDNA與pSPORT1載體的連接和轉化，獲得蝎毒腺組織cDNA文庫。在構建文庫的基礎上，隨機挑選2000克隆子進行測序，序列分析發現第1283克隆子為一個新的西藏琵蝎抗病毒多肽基因，命名為AHSVP1。

本發明公開了一種分離的西藏琵蝎多肽基因AHSVP1，其序列為SEQ?IDNO：1所示的核苷酸序列：