[發明專利]致病桿菌抗菌肽及其在抑制病原真菌和細菌生長中的應用

無效

• 申請號: 201110328254.2
• 申請日: 2011-10-25
• 公開（公告）號: CN102351949A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 楊秀芬;邱德文;曾洪梅;郭立華;劉崢;袁京京;肖堯
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A01N43/36;A01P1/00;A01P3/00
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司 11241
• 代理人: 盧新;解政文

技術領域

本發明涉及一種含有不多于20個氨基酸的肽段。

背景技術

抗菌肽是一類具有抗菌活性的多肽類物質，其分子量通常在幾百到一萬道爾頓之間，氨基酸個數從幾個到幾十個不等。因為其具有性質穩定、廣譜抗菌、且不易產生耐受菌株等諸多優點而備受青睞。另有報道，抗菌肽是先天免疫反應中進化比較保守的一種產物，幾乎所有生物都存在抗菌肽。申請人從昆蟲病原線蟲共生菌中挖掘新結構的抗菌肽，不僅可以提供寶貴的抗菌資源，而且為共生菌的開發利用開辟了新的途徑。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種能抑制病原真菌和細菌生長的致病桿菌(Xenorhabdus?budapestensis?NMC-10)抗菌肽及其應用。

一種致病桿菌抗菌肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發明還涉及致病桿菌抗菌肽在抑制病原真菌生長中的應用。

本發明致病桿菌抗菌肽在抑制病原真菌生長中的應用，其中所述病原真菌為辣椒疫霉菌、大麗輪枝菌、禾谷鐮刀菌和/或灰葡萄孢菌。

本發明還涉及致病桿菌抗菌肽在抑制細菌生長中的應用。

本發明致病桿菌抗菌肽在抑制細菌生長中的應用，其中所述細菌為枯草芽孢桿菌、番茄瘡痂病菌、青枯菌、普通變形桿菌和/或巨大芽孢桿菌。

本發明與現有技術不同之處在于提供一種致病桿菌抗菌肽，1.0μg/ml的該抗菌肽用于抑制病原真菌生長時，對辣椒疫霉菌、大麗輪枝菌、禾谷鐮刀菌和灰葡萄孢菌的抑制率分別為60.01％、74.00％、49.21％、60.71％；1.0μg/ml的該抗菌肽用于抑制細菌生長時，對枯草芽孢桿菌、番茄瘡痂病菌、青枯菌、普通變形桿菌和巨大芽孢桿菌分別能形成19.04±0.2mm、16.47±0.35mm、10.75±0.41mm、10.3±0.33mm、7.3±0.28mm的抑菌圈。

下面結合附圖對本發明致病桿菌抗菌肽及其在抑制病原真菌和細菌生長中的應用作進一步說明。

附圖說明

圖1是通過不同飽和度的硫酸銨沉淀所獲得沉淀物的抑菌活性；

圖2是NMC-10粗提物進行離子交換層析的層析圖，其中“Q穿”表示穿透峰、E1表示第一洗脫峰、E2表示第二洗脫峰；

圖3A是離子交換層析收集的各組分對辣椒疫霉菌的抑制作用；其中：“總”表示NMC10粗提物，“穿”表示穿透峰組分，E1表示第一洗脫峰組分、E2表示第二洗脫峰組分；

圖3B是離子交換層析收集的各組分對枯草芽孢桿菌的抑制作用；其中：“總”表示NMC10粗提物，“穿”表示穿透峰組分，E1表示第一洗脫峰組分、E2表示第二洗脫峰組分；

圖4是離子交換層析收集的各組分進行Tricine-SDS-PAGE的電泳圖；其中：“稀釋總”表示稀釋過的NMC10粗提物，“Q穿”表示穿透峰組分，E1表示第一洗脫峰組分、E2表示第二洗脫峰組分；

圖5是穿透峰組分進行反相層析的圖譜；圖中5-10代表反相層析中收集管的編號；

圖6是反相層析中收集的各組分對辣椒疫霉菌的抑制作用；圖中1-10代表反相層析中收集管的編號；

圖7是將活性最強的收集管5-8中的組分分別稀釋2、8、64倍后測定其對辣椒疫霉菌的抑制作用，圖中5A、5B、5C分別表示收集管5中的組分稀釋2、8、64倍，圖中6A、6B、6C分別表示收集管6中的組分稀釋2、8、64倍，圖中7A、7B、7C分別表示收集管7中的組分稀釋2、8、64倍，圖中8A、8B、8C分別表示收集管8中的組分稀釋2、8、64倍；

圖8是收集管8中的組分再次進行反相層析的圖譜，2C2-12，2D9-12都表示收集管的編號；

圖9A是再次進行反相層析時收集的各組分進行Tricine-SDS-PAGE的電泳圖，2C2-3和2C4都表示收集管編號；

圖9B是再次進行反相層析時收集的各組分對辣椒疫霉菌的抑制作用；

圖10是2C2-3繼續進行反相層析分離純化時獲得的一個組分質譜圖。

具體實施方式

實施例1?致病桿菌培養及發酵代謝液制備