[發(fā)明專利]擬穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110327329.5
• 申請(qǐng)日: 2011-10-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102352363A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉海鵬;陳榮元;王克堅(jiān)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/63;C07K14/435;A61K38/17;A61P31/00;A61P31/12;A23K1/17
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗病毒型抗脂多糖因子，尤其是涉及一種擬穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

白斑綜合征病毒(white?spot?syndrome?virus，WSSV)不僅是危害對(duì)蝦的主要病毒性病原，而且能夠感染其他許多甲殼類十足目動(dòng)物，而這其中包括許多重要水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種。WSSV病害自1993年發(fā)生以來(lái)，給全球水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失，近20年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在WSSV侵染和水生甲殼動(dòng)物抗WSSV免疫研究方面取得了一些關(guān)鍵性進(jìn)展，遺憾的是，至今尚無(wú)針對(duì)此病毒的有效防治方法。

眾所周知，與脊椎動(dòng)物相比，蝦、蟹等無(wú)脊椎甲殼動(dòng)物缺乏后天免疫應(yīng)答系統(tǒng)，它們僅依靠非特異性免疫來(lái)抵御微生物入侵感染。已有研究表明：病毒感染對(duì)蝦、蟹后能夠激活宿主的免疫識(shí)別信號(hào)傳導(dǎo)通路，如NF-kappaB信號(hào)通路^[1，2]、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)信號(hào)通路^[3]和STAT信號(hào)通路^[4]等，從而引發(fā)一系列免疫應(yīng)答反應(yīng)，包括抗菌肽的合成與釋放^[3，5]、細(xì)胞吞噬^[6]和細(xì)胞凋亡^[7]等，這些免疫應(yīng)答反應(yīng)在甲殼類動(dòng)物抵御外界病原微生物感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用。值得一提的是，近年來(lái)陸續(xù)有一些抗病毒活性物質(zhì)得以分離鑒定，諸如：血藍(lán)蛋白^[8]、溶菌酶^[9]、抗菌肽^[5，10-13]等，這些研究報(bào)道為蝦、蟹等水產(chǎn)養(yǎng)殖病毒病的有效防治提供了重要理論依據(jù)。

抗脂多糖因子首次發(fā)現(xiàn)于鱟^[14，15]體內(nèi)，該因子具有抗凝血作用，能夠抑制細(xì)菌脂多糖(LPS)引發(fā)的凝集反應(yīng)，故命名為抗脂多糖因子。研究表明，ALF對(duì)LPS具有高親和力，能夠結(jié)合LPS的類脂A部位并中和其生物學(xué)活性，對(duì)于抵抗內(nèi)毒素血癥和內(nèi)毒素休克具有重要作用；此外，ALF對(duì)R-型革蘭氏陰性菌生長(zhǎng)具有強(qiáng)烈抑制作用^[15]。ALF在其他多種甲殼動(dòng)物體內(nèi)也相繼得以分離鑒定，并且ALF在LPS^[16-18]、細(xì)菌、真菌^[19-22]和WSSV^[23]刺激后均有不同程度的上調(diào)表達(dá)，而體外重組表達(dá)的ALF蛋白也表現(xiàn)出廣譜抗菌活性，包括對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制與殺傷作用^{[16，20，24]}。近期研究表明，螯蝦Pl-ALF具有顯著的抗WSSV活性^[13]，而對(duì)蝦Pm-ALF3^[11]亦顯示出抗WSSV活性。綜上所述，ALF是水生甲殼類動(dòng)物的重要免疫因子，對(duì)其功能的深入鑒定研究不僅在抗微生物感染理論研究方面具有重要意義，而且在生產(chǎn)實(shí)踐中亦具有廣泛應(yīng)用前景。

擬穴青蟹Scylla?paramamosain與基因工程，特別涉及擬穴青蟹抗病毒型抗脂多糖因子(Anti-lipopolysaccharide?factor)，即Sp-ALF2基因克隆、重組表達(dá)產(chǎn)物及其制備方法，尤其是利用紅螯螯蝦造血組織干細(xì)胞作為細(xì)胞模型進(jìn)行Sp-ALF2產(chǎn)品抗WSSV感染的抗病毒實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

參考文獻(xiàn)如下：

1.Huang?XD，Zhao?L，Zhang?HQ，Xu?XP，Jia?XT，Chen?YH，Wang?PH，Weng?SP，Yu?XQ，YinZX?et?al.Shrimp?NF-kappaB?binds?to?the?immediate-early?gene?ie?1promoter?of?white?spotsyndrome?virus?and?upregulates?its?activity[J].Virology，2010，406(2)：176-180.

2.Li?F，Wang?D，Li?S，Yan?H，Zhang?J，Wang?B，Xiang?J.A?Dorsal?homolog(FcDorsal)in?theChinese?shrimp?Fenneropenaeus?chinensis?is?responsive?to?both?bacteria?and?WSSV?challenge[J].Dev?Comp?Immunol，2010，34(8)：874-883.