[發明專利]一種用于檢測副溶血性弧菌的分子馬達生物傳感器試劑盒

無效

• 申請號: 201110326915.8
• 申請日: 2011-10-25
• 公開（公告）號: CN103074413A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 張捷;張惠媛;張昕;汪琦;顧德周;陳廣全
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是關于食品微生物快速檢測技術的一種。

背景技術

傳統的副溶血性弧菌檢測方法要求對每個檢驗項目進行非選擇性增菌、選擇性增菌、分離、篩選和鑒定等步驟，一般需要4天才能出具檢測報告，嚴重影響貨物的品質和貨架壽命。一些新的技術如PCR技術、免疫學檢測技術、生物芯片技術等檢測方法仍依賴于傳統的檢測步驟，即需要進行增菌，耗時耗力，完成一次檢測通常需要幾天的時間。這樣不僅增加了實驗室的工作量，而且也不利于食品工業中生產流程的監測、終產品的質量控制以及政府部門對食品安全的管理和控制。

發明內容

以受控分子馬達技術為核心，集成核酸探針識別、熒光探針標記與檢測等技術，建立了一個全新概念的快速檢測技術體系。利用ATP酶作為載體對目標物進行檢測具有靈敏度高、特異性強、快速的特點。在F₀F₁-ATPase分子馬達連接上特異的核酸探針，可以實現對特定食品微生物的快速、特異性、高通量的檢測。本發明可將檢測時間縮短至2天，且檢測靈敏度能達到10²CFU/ml，滿足現有的食品微生物檢測范圍。

附圖說明

附圖1為分子馬達生物傳感器模式圖(其中a、b、c、α、β、δ、γ、ε均為ATP合酶亞基)，1為ε亞基抗體，2為鏈霉親和素(Strptavidin)，3為N-biotin，4為toxR探針，5為副溶血性弧菌單鏈DNA。

附圖2為chro?toxR對不同種菌株的檢測結果，縱坐標表示熒光值，橫坐標表示檢測的樣本，其中1為水，2為副溶血性弧菌，3為沙門氏菌，4為單增李斯特氏菌，5為霍亂弧菌，6為大腸桿菌。

附圖3為chro?toxR對30株副溶血性弧菌樣本的檢測結果，縱坐標表示熒光值，橫坐標表示檢測的樣本，1～30為食品檢測樣本編號。

具體實施方式

根據沙門氏菌toxR基因設計特異性核酸探針5’-gtcttctgacgcaatcgttg，其中探針的5’用生物素進行標記。將該探針通過生物素抗體連接在分子馬達上面，利用分子馬達生物傳感器即可對待測樣本的DNA進行檢測，當樣品為副溶血性弧菌DNA時，檢測體系的熒光值會發生明顯的變化，通過這一變化即可判斷樣本為陽性。為此，我們設計了一個試劑盒，可以方便、快速對食品中的副溶血性弧菌進行檢測。

試劑盒組成：