[發(fā)明專利]東方百合種球的試管繁育方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110326506.8
• 申請日: 2011-10-24
• 公開（公告）號: CN102499082A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃宇翔;鐘海豐
• 申請（專利權(quán)）人: 清流縣鴻翔農(nóng)莊農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及花卉組培苗方法，特別是東方百合種球的試管繁育。

背景技術(shù)：

東方百合是百合科百合屬的多年生球根類花卉，其花大美麗、色彩豐富、香味濃郁，具有較高的觀賞價值和經(jīng)濟(jì)價值，是世界四大切花之一。我國切花產(chǎn)業(yè)中東方百合所占比重越來越大，然而多數(shù)種球仍依靠進(jìn)口，質(zhì)量參差不齊，嚴(yán)重制約我國百合鮮切花的發(fā)展。利用組織培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合莖尖脫毒可生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)無病毒種球，然而我國百合的種球國產(chǎn)化生產(chǎn)仍進(jìn)展緩慢，現(xiàn)有的種球繁育技術(shù)一般是先通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)百合種苗，然后在大田進(jìn)行3-4年的種球繁育，達(dá)到商品種球的規(guī)格。

植物組織培養(yǎng)(Tissue?culture)是指用無菌方法使植物體的離體(in?vitro)器官、組織和細(xì)胞在人為提供的條件下生長和發(fā)育的所有培養(yǎng)技術(shù)的總稱，也稱之為離體培養(yǎng)(In?vitro?culture)或試管培養(yǎng)。

在百合組培中，常常因?yàn)榕囵B(yǎng)出的當(dāng)年試管鱗莖周徑小、重量輕，導(dǎo)致栽種成活率低，僅長葉不抽莖，種植3-4年后才能達(dá)到商品球的規(guī)格和標(biāo)準(zhǔn)。如果提高百合組培小鱗莖栽種當(dāng)年的抽莖率，則可以縮短繁殖栽培年限。因此，通過改善培養(yǎng)條件促進(jìn)組培小鱗莖在瓶內(nèi)的膨大和增重，是百合組培小鱗莖出瓶栽種后快速生長和提高抽莖率的關(guān)鍵因子。

現(xiàn)有研究研究結(jié)果表明鱗片不同部位誘導(dǎo)小鱗莖的能力從強(qiáng)到弱依次為基部＞中部＞尖部，中層＞外層＞內(nèi)層。小鱗莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L?6-BA+0.2mg/L?NAA。在一定濃度范圍內(nèi)，隨蔗糖和PP333(一種生長調(diào)節(jié)劑)濃度的增加，小鱗莖的增殖速度加快，二者最適濃度分別為9％和15mg/L。黑暗較光照利于小鱗莖的增殖。

A、鱗片的選擇和消毒程序；

選取東方百合種球中層鱗片，用牙刷蘸上洗衣粉除去鱗片表面雜質(zhì)，用清水沖洗干凈后，在超凈工作臺上先用70％酒精處理45s，無菌水沖洗3-4遍，0.1％升汞消毒13min，無菌水沖洗5-7遍后備用。(用于建立百合的無菌體系)

B、鱗片的誘導(dǎo)；

將消毒過的鱗片切分成1cm×1cm的小方塊，內(nèi)側(cè)朝上接種于MS+2.0mg/L?6-BA+0.2mg/L?NAA+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行鱗片誘導(dǎo)，誘導(dǎo)率達(dá)到98％以上，平均每片鱗莖誘導(dǎo)不定芽3.3個。(用于從鱗片上誘導(dǎo)小鱗莖)

C、小鱗莖的增殖；

30-40d后將誘導(dǎo)出來的小鱗莖轉(zhuǎn)接至MS+1.0-2.0mg/L6-BA+1.0mg/L?KT+0.2mg/L?NAA+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行小鱗莖增殖，黑暗培養(yǎng)，增殖系數(shù)達(dá)到6.01。

D、試管內(nèi)成球。

在無菌條件下將叢芽分割成單個芽，剪去上部葉片，接種于2MS+6-BA?1.0mg/L+NAA?0.2mg/L+蔗糖70g/L+瓊脂7g/L的成球培養(yǎng)基中誘導(dǎo)試管成球，試管成球率96％，鮮重平均增重12.8倍，平均直徑增加4.5倍。

現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)：1、百合組培苗移栽成活率低；2、由于組培苗鱗莖小，需要在大田繁育的周期長；3、生產(chǎn)成本高，繁育過程易受自然環(huán)境的影響。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于克服上述缺陷，提供一種東方百合種球的試管繁育方法。

本發(fā)明的方案是：包括：①鱗片的選擇和消毒程序；②鱗片的誘導(dǎo)；③小鱗莖的增殖；④試管的成球；其特征在于：鱗片的誘導(dǎo)工序是將消毒過的鱗片切取靠近基部1-1.5cm長的鱗片，內(nèi)側(cè)朝上接種于MS+6-BA?2mg/L+NAA?0.2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行鱗片誘導(dǎo)；小鱗莖的增殖工序是30-40d后將誘導(dǎo)出來的小鱗莖轉(zhuǎn)接至MS+6-BA?2mg/L+NAA?0.2mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂7g/L的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行小鱗莖增殖，正常光照培養(yǎng)；兩個月以后進(jìn)入試管的成球，將小鱗莖轉(zhuǎn)入MS+6-BA?0.2mg/L+NAA0.5mg/L+CCC?150mg/L+蔗糖80g/L+瓊脂7g/L成球培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基PH值均為5.8，培養(yǎng)條件均為光照強(qiáng)度2000-2200lx，14h/d，溫度23-25℃，直至成球。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：其一，在百合成球培養(yǎng)基中通過添加矮壯素(CCC)，可明顯提高種球得直徑和鮮重；其二，利用試管內(nèi)成球技術(shù)可明顯縮短東方百合種球在大田的生長周期，提高種球移栽成活率，加快百合種苗的抽莖，縮短東方百合商品種球的繁育周期，從而降低生產(chǎn)成本。

具體實(shí)施方式：

東方百合試管內(nèi)種球繁育技術(shù)涉及東方百合組織培養(yǎng)技術(shù)，包括：