[發明專利]一種轉基因棉花檢測通用質粒標準分子及其構建方法

有效

• 申請號: 201110324371.1
• 申請日: 2011-10-22
• 公開（公告）號: CN102433377A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 王旭靜;王志興;唐巧玲
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 史雙元

技術領域

本發明屬于轉基因植物檢測技術領域，具體涉及一種轉基因棉花檢測通用質粒標準分子及其構建方法。

背景技術

隨著轉基因技術的飛速發展，越來越多的轉基因產品問世并大規模商業化應用。世界各國都在完善對轉基因產品的安全監管。核酸檢測是對轉基因產品進行安全監管的有效方法之一，在核酸檢測過程中，為防止假陽性的出現，必須要有標準陽性物質作為參考。目前常用的來源于純合轉基因植物的標準陽性物質在制備、貯藏和測定等方面都受很多因子影響，而且并非所有的作物轉基因品系都存在這類標準陽性物質，從而影響到對轉基因產品的分子檢測。因此，標準陽性物質的缺乏已成為限制轉基因產品檢測的主要因子之一，急需研制標準陽性物質的替代品。Taverniers等于2001年提出“單靶標質粒分子”概念，即將不同目標DNA片段分別克隆到載體上用作標準分子(Taverniers?I，Windels?P，Bocktaele?E?V，et?al.Use?of?cloned?DNA?fragments?for?event?specific?quantification?of?genetically?modified?organisms?in?pure?and?mixed?food?products.Eur?Food?Res?Tethnol，2001，213(6)：417-424)。2002年，日本科學家Kuribara提出了質粒標準分子的概念(Kuribara?H，Shindo?Y，Matsuoka?T，et?al.Novel?reference?molecules?for?quantitation?of?genetically?modified?maize?and?soybean.J?AOAC?Int，2002，85(5)：1077-1089)，質粒標準分子可以通過將需檢測的基因片段克隆到克隆載體上而獲得，操作很簡單。另外，質粒標準分子還具有純度高、穩定性好、易于保存等優點。經驗證質粒標準分子在GMO鑒定檢測中是很好的標準陽性物質替代物，如Corbisier等構建的檢測MON810的質粒標準分子經歐盟聯合研究中心標準物質方法研究所測試，最終注冊并命名為有證標準物質ERM-AD413(Corbisier?P，Broeders?S，Charels?D，et?al.Certification?of?plasmidic?DNA?containing?MON810maize?DNA?fragments，ERM-AD413.EC?certification?report，2007，EUR?22948，ISBN?978-92-79-07139-3)。因此，構建陽性標準分子已經成為國際上轉基因檢測領域的研究熱點。目前，國外已獲得多種轉基因產品檢測用質粒標準分子(Debode?F，Marien?A，Janssen?E.Design?of?multiplex?calibrant?plasmids，their?use?in?GMO?detection?and?the?limit?of?their?applicability?for?quantitative?purposes?owing?to?competition?effects.Anal?Bioana?Chem，2010，396：2151-2164)。我國也開展了許多陽性標準分子質粒構建方面的研究，成功構建了多種陽性標準分子。如上海交通大學建立的多種陽性標準分子(Yang?L?T，Guo?J?C，Pan?A?H，et?al.Event?specific?quantitative?detection?of?nine?genetically?modified?maizes?using?one?novel?standard?reference?molecule.J?Agri?Food?Chem，2007，55(1)：15-24)，東北農業大學構建的轉基因水稻、玉米和大豆通用質粒標準分子(敖金霞，高學軍，曲波，等.轉基因大豆、玉米和水稻外源基因檢測通用標準分子的構建[J].中國農業大學學報，2008，13(6)：19-24)、吉林農科院構建的檢測MON89788的質粒標準分子(李飛武，邵改革，邢珍娟，等.轉基因大豆MON89788檢測質粒標準分子的構建與應用。安徽農業科學，2010，38(23)：12330-12333)，中國農業科學院油料作物研究所構建的轉基因作物篩查用陽性標準分子等(胡尚杰，吳剛，武玉花，等。轉基因作物篩查用陽性質粒分子的構建及應用研究。中國油料作物學報，2010，32(2)：173-179)。轉基因抗蟲棉已大規模商業化應用，目前市場上種植的抗蟲棉主要有孟山都公司的轉Bt基因的抗蟲棉，以及中國農業科學院生物技術研究所研發的轉Bt或CPTI的抗蟲棉。上海交通大學構建的轉基因棉花質粒分子主要是針對Bt設計的，尚未有檢測轉基因棉花的通用質粒標準分子。