[發明專利]一種黃連木種子內生菌去除及快速萌發的方法

有效

• 申請號: 201110323130.5
• 申請日: 2011-10-22
• 公開（公告）號: CN102498793A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 吳麗芳;侯金艷;李明浩
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: A01C1/02
• 分類號: A01C1/02;A01C1/08
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

技術領域

本發明涉及生物技術與現代農業技術領域，具體涉及一種黃連木種子內生菌去除及快速萌發的方法。

背景技術

????黃連木(pistacia?chinensis?Bunge)是一種重要的多年生木本油料植物，分布范圍廣，可在荒山荒地和沙地種植，適宜大面積造林，而且種子含油率高達40%以上，用黃連木種子生產的生物柴油是清潔的可再生能源，是優質的石油柴油代替品，已經被確定為未來生態能源林建設和生物質柴油產業優先發展樹種。由于其被作為生物質能源樹種的前景看好，目前針對黃連木的研究越來越多，但基本都是集中在栽培技術等方面，而對于其組織培養及遺傳轉化方面的研究較少；目前，國家對于發展生物能源林建設愈來愈重視，通過分子手段來進行遺傳改良是一種較快的方式。然而，黃連木存在種子消毒不易徹底、萌芽緩慢、發芽率低等問題，因此需要一種既能較好的去除其污染又能提高發芽率的方法。通過使用一般的消毒方式效果很是不理想，因此開發一種低污染、高發芽率的方法更加顯得迫在眉睫。

發明內容

黃連木無菌外植體的獲得是進行組織培養及遺傳轉化研究的基礎。然而，由于黃連木種子消毒不易徹底，特別是儲存時間長或梅雨季節更是甚難，嚴重影響了其研究進度。因此，發明一種不僅消毒效果好而且發芽率高，獲得的無菌苗比較健壯的方法是本發明的重要特征。

本發明的目的在于針對黃連木普通消毒效果不理想的問題，設計一種不但消毒效果好而且獲得的無菌苗發芽率高、生長健壯的方法。

為了實現上述目的本發明采用如下技術方案：

一種黃連木種子內生菌去除及快速萌發的方法，其特征在于：將去除外殼的黃連木種子經乙醇和次氯酸鈉消毒處理，然后將種子浸泡在水中進行超聲處理，沖洗干凈后接種在種子萌發培養基上，獲得無菌健壯的實生苗。

所述的黃連木內生菌去除及快速萌發的方法，其特征在于：所述的乙醇和次氯酸鈉消毒處理是指將種子先用65-75%的乙醇處理1分鐘，無菌水沖洗一次，然后用15-25%的次氯酸鈉處理10分鐘。

所述的黃連木內生菌去除及快速萌發的方法，其特征在于：所述的超聲處理是指將種子浸泡在無菌水中，然后放在溫度設置在18-22℃的超聲儀器中處理8-12分鐘，之后無菌水清洗干凈。

所述的黃連木內生菌去除及快速萌發的方法，其特征在于：所述的萌發培養基是指：1/2MS+6-BA2.0?mg/L+SNP15?mg/L+葡萄糖20g/L+瓊脂8?g/L，pH調至5.8-6.0。

本發明的有益效果：

本發明巧妙的將普通消毒與超聲波處理相結合，通過他們之間的協同作用，顯著降低了種子內生菌的污染率，同時提高了種子的發芽率；將消毒干凈的種子接種在特定培養基上，獲得了生長健壯的無菌苗。

具體實施方式

實施例1：黃連木種子內生菌去除及快速萌發的具體操作方法如下：

1、將去除外殼的黃連木種子首先用純水清洗幾次，然后用70%的乙醇處理1分鐘，無菌水沖洗一次，接著用20%的次氯酸鈉處理10分鐘，期間不停地搖動，無菌水沖洗3-4次；

2、經沖洗干凈的種子浸泡在無菌三角燒瓶中，放入超聲儀器20℃超聲處理10分鐘，之后無菌水沖洗至干凈；

3、將消毒干凈的種子接種在萌發培養基1/2MS+6-BA2.0?mg/L+SNP15?mg/L+葡萄糖20g/L+瓊脂8?g/L，一周左右即可獲得無內生菌污染、發芽率高且生長粗壯的無菌實生苗。