[發(fā)明專利]麻疹長-47株制備二倍體細胞減毒活疫苗及制備工藝無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110322559.2 | 申請日： | 2011-10-21 |
| 公開（公告）號： | CN102343087A | 公開（公告）日： | 2012-02-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鄭曉麗;王瑋;姜威;禇東琳;閆磊;王擁軍;鄒勇;沈宏杰;張宇;張勇;雙慧 | 申請（專利權(quán)）人： | 長春祈健生物制品有限公司 |
| 主分類號： | A61K39/155 | 分類號： | A61K39/155;A61P31/14 |
| 代理公司： | 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100 | 代理人： | 陳宏偉 |
| 地址： | 130012*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 麻疹 47 制備 二倍 體細胞 減毒活 疫苗 工藝 | ||
1.一種麻疹長-47株制備二倍體細胞減毒活疫苗制備工藝，包括以下步驟：
1）將人胚肺二倍體細胞按1：2—1：4比例傳代至細胞工廠，E-MEM培養(yǎng)液的pH為7.2~7.6、牛血清含量為10~15%（ml/ml）、濃度為3%的谷氨酰胺含量為1%，加入量為每層細胞工廠體積的30~40%；同時，以長-47株麻疹病毒1：（100~1000）的感染復(fù)數(shù)加入細胞工廠中，33℃培養(yǎng)細胞及病毒；
2）當細胞出現(xiàn)50~60%病變時，棄去細胞工廠內(nèi)的液體，以培養(yǎng)液2-3倍的HanKs′液或PBS液清洗細胞表面，充分振搖后排空洗液；加入199疫苗液，加入量為每層細胞工廠體積的25~40%，33℃繼續(xù)培養(yǎng)；收獲病毒液，重復(fù)三次；
3）將三次收獲的病毒液保存于（2~8）℃，待無菌試驗合格后，將病毒液通過0.65μm孔徑的中空纖維濾柱進行過濾澄清，以孔徑為300k的超濾膜濃縮5~10倍，保存于（2~8）℃或（-25~-20）℃。
2.?一種麻疹長-47株制備二倍體細胞減毒活疫苗制備工藝，包括以下步驟：
1）將人胚肺二倍體細胞按1：2—1：4比例傳代傳至細胞工廠，E-MEM培養(yǎng)液的pH為7.2~7.6、牛血清含量為10~15%（ml/ml）、濃度為3%的谷氨酰胺含量為1%，加入量為每層細胞工廠體積的30~40%；37℃培養(yǎng)3-5天，對人胚肺二倍體細胞進行傳代；
2）以長-47株麻疹病毒1：（100~1000）的感染復(fù)數(shù)感染人胚肺二倍體細胞，所用維持液E-MEM培養(yǎng)液的pH為7.4~7.6、牛血清含量為2~3%（ml/ml）、濃度為3%的谷氨酰胺含量為1%，加入量為每層細胞工廠體積的30~40%；
3）當細胞出現(xiàn)50~60%病變時，棄去細胞工廠內(nèi)的液體，以培養(yǎng)液2-3倍的HanKs′液或PBS液清洗細胞表面，充分振搖后排空洗液；加入199疫苗液，加入量為每層細胞工廠體積的25~40%，33℃繼續(xù)培養(yǎng)；當細胞病變出現(xiàn)75%開始進行收獲病毒液，重復(fù)三次；
4）將三次收獲的病毒液保存于（2~8）℃，待無菌試驗合格后，將病毒液通過0.65μm孔徑的中空纖維濾柱進行過濾澄清，以孔徑為300k的超濾膜濃縮5~10倍，保存于（2~8）℃或（-25~-20）℃。
3.?權(quán)利要求1或2所述的麻疹長-47株制備二倍體細胞減毒活疫苗制備工藝，其特征在于：所述的人胚肺二倍體細胞選自：2BS株或KMB-17或MRC-5。
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