[發明專利]一種用于鑒定油茶品種的方法及其專用引物和試劑盒

無效

• 申請號: 201110321973.1
• 申請日: 2011-10-21
• 公開（公告）號: CN102321768A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 尹佟明;施季森;史潔;管宏偉;戴曉港;陳金慧
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 邱興天

技術領域

本發明涉及油茶品種的鑒定方法，具體涉及一種用于鑒定油茶品種基于遺傳基因的方法及其專用引物和方法。

背景技術

油茶是世界四大木本油料樹種之一，也是我國最重要的木本油料經濟作物，其壽命長，具有一次種植、多年受益的特點，穩定收獲期可長達80年以上。然而，一旦誤用不當或偽劣品種造林，影響也將是深遠的。近年我國政府投入巨資，大力發展油茶產業。按國家發展規劃，到2015年全國的油茶種植規模將要達到六千萬畝左右。在油茶產業蓬勃發展過程中，造林種苗是否為真實的優良品種，如同優良品種的選育本身一樣，也是油茶林優質高產的基礎。為確保油茶產業健康發展，急需建立一套真實、簡便、快速、可靠的油茶品種遺傳真實性鑒定技術，以滿足對油茶種苗生產的監督檢查、對新品種進行認定，以及對育種工作者的知識產權進行保護的需要。

植物品種遺傳真實性鑒定的關鍵是所依賴的技術手段。以往植物品種鑒別所采用的方法主要是依據植物的形態特征。但植物品種間在形態上的差異，特別是苗期的差異，往往并不十分顯著。尤其對油茶這類世代周期長的物種，性狀的差異一般到了成熟期才能表現出來，大多數品種根本無法從幼苗的形態上進行鑒別。自上世紀八十年代以來，現代分子標記技術的應用，為植物新品種的鑒定提供了準確可靠的技術手段。分子標記是以DNA為基礎的標記技術，是指能反映生物個體或種群間基因組差異的特征DNA片段，也稱DNA指紋圖譜。隨著分子標記技術的發展，通過DNA指紋技術鑒別生物個體已經成為一項成熟的技術，并在許多植物新品種鑒別中得到了廣泛應用。分子標記技術直接以植物DNA為分析對象，從根本上克服了環境的影響，同時也不受基因表達的限制，在DNA水平上進行品種遺傳真實性鑒定不僅可靠性高，而且大大提高了檢測效率。常見的分子標記有RFLP(Restriction?Fragment?Length?Polymorphism限制片段長度多態性)、ISSR(Inter-simple?sequence?repeat簡單重復序列)、RAPD(Random?amplified?polymorphic?DNA)、AFLP(Amplified?Fragment?Length?Polymorphism，擴增片段長度多態性)、SSR(Simple?Sequence?Repeat，簡單重復序列)等。應用分子標記對植物品種進行遺傳真實性鑒定需要考慮以下因素：1.簡便、快速，易于在實際檢驗工作中推廣使用；2.標記針對待檢物種有高度特異性，使檢測結果不受內源和外源微生物或病原菌影響；3.標記擴增基因位點多態性高，可以利用較少的引物組合達到較高的檢測精度?？紤]上述要求，微衛星標記是目前不同標記類型中，用于植物品種遺傳真實性鑒定的最高效的分子標記。微衛星DNA也稱簡單重復序列，是由長度為1-6bp串聯重復序列組成，微衛星是基因組中變異最為迅速的序列，其高度多態性主要來源于串聯數目的不同。微衛星標記是基于PCR擴增為基礎的標記，微衛星標記分析相對于基于分子雜交為基礎的標記要簡便、快速的多。同時微衛星引物是由待檢物種的基因組序列開發而來，具有極高的種屬特異性，這樣既使樣品中含有不同的內源和外源微生物或病原菌污染，檢測結果也不會受到干擾。這一優點是RAPD或AFLP等這類隨機標記所不具備的。

油茶不同品種間同一位點的SSR重復次數存在差異，造成了品種間等位位點的長度多態性。根據微衛星序列兩端互補序列設計引物，通過PCR反應擴增微衛星片段，由于微衛星串聯重復數目不同，通過擴增片段的電泳分離，可以獲得不同微衛星位點的基因型頻率信息。根據不同品種在不同微衛星位點的基因型頻率，就可以估算出不同品種遺傳真實性鑒定的準確概率。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種真實、簡便、快速、可靠的用于鑒定油茶品種的方法，為油茶新品種保護，保證油茶產業的健康和可持續發展，把好種苗質量關，提供關鍵技術支撐。本發明的另一目的是提供一種上述用于鑒定油茶品種的方法的專用引物。本發明還有一目的是提供上述用于鑒定油茶品種的方法的試劑盒。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

一種用于鑒定油茶品種的專用引物，所述引物至少為下表中的2個引物對：