[發明專利]一種偶氮類色素半抗原與人工抗原的合成方法

無效

• 申請號: 201110321571.1
• 申請日: 2011-10-21
• 公開（公告）號: CN102424661A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 王文虎;劉亭亭;任新霞;宋英俊;周秀秀;趙秀杰
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C07C323/62
• 分類號: C07C323/62;C07C319/06;C07K14/765;C07K1/113
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

【技術領域】

本發明涉及偶氮類色素衍生物，尤其涉及一種偶氮類色素半抗原及其人工抗原通用的制備方法，屬于有機合成領域。

【背景技術】

為了改善食品的色澤，在加工食品的過程中，常常要使用色素類物質，即食用色素。食用色素使用較多的是食用合成色素，且大多為偶氮類色素。一般情況下，偶氮類色素本身不會對人體產生有害影響，但是水溶性的偶氮染料會被腸道菌分解成芳香胺，非水溶性的偶氮染料則會被肝內的酶分解還原成芳香胺，有些芳香胺是誘變劑或致癌劑，或有其他生物毒性，這些化合物被人體再次吸收，經過活化作用，會使人體細胞發生結構與功能的改變，轉變成人體病變誘發因素，從而增加致癌的可能性。偶氮色素已被確定為不安全的，它具有潛在的致癌性。

由于其致癌性和致突變性，世界上很多國家都對偶氮類染料的使用實施了嚴格的規定。瑞典、芬蘭、挪威、印度、丹麥、法國等早已禁止使用偶氮類色素，其中挪威等一些國家還完全禁止使用任何化學合成色素。我國對偶氮類色素物質在食品中的應用做了嚴格的規定，但是由于多種原因，在食品中違法使用色素的現象屢有發生，成為引發食品安全問題的因素之一，對廣大人民群眾的身體健康造成嚴重威脅。“蘇丹紅”事件既是典型事例之一。另外，由于不法廠商在出口食品中違法添加偶氮類色素物質，造成多起我國出口歐美日的食品被檢出含有偶氮類色素物質，到岸后被就地銷毀，在造成經濟損失的同時，也嚴重損害了我國出口商品的信譽。因此加強偶氮類色素檢測方法的研究具有重要的意義。

目前偶氮類色素的檢測方法僅限于高效液相法、質譜法等儀器方法，雖準確、穩定、可靠，可作為標準方法，但價格昂貴，費時較長，需要大型儀器設備，并且需要專門的技術人員，所以難于用于現場操作。而酶聯免疫檢測法(ELISA)具有靈敏、快速、簡便、特異性好、樣品需求量少、對昂貴儀器以及專業操作人員的依賴程度較低等優點，非常適于現場監控和樣品的批量檢測。但目前見諸報道的僅限于少數幾種偶氮類色素物質的酶聯免疫檢測法。其他大多素偶氮類色素物質的酶聯免疫檢測方法在國內外尚未見報道。為彌補這一空白，有必要研究偶氮類色素半抗原以及人工抗原通用的合成路線，在此基礎上建立相關的酶聯免疫檢測方法。

【發明內容】

本發明的目的在于提供一種偶氮類色素半抗原及人工抗原通用的合成方法。

本發明的技術方案如下：

(1)將偶氮類色素I與二氯亞砜以1∶6-1∶7的摩爾比溶在甲苯中，加熱回流反應2h后停止。旋蒸除去剩余的二氯亞砜與甲苯，得到磺酰氯II。

(2)將磺酰氯II與二甲胺鹽酸鹽以1∶3的摩爾比溶于丙酮中，與6倍量堿(三乙胺、吡啶、氫氧化鈉、碳酸鉀)及DMAP室溫反應1h，蒸除丙酮，柱色譜分離，得到偶氮類色素磺酰胺III。

(3)將偶氮類色素磺酰胺III與4，4’-二硫二苯甲酰氯以2∶1的摩爾比溶于二氯甲烷中，與4倍量堿(三乙胺、吡啶、氫氧化鈉、碳酸鉀)及DMAP室溫反應1h，柱色譜分離，得到偶氮類色素衍生物IV。

(4)將IV與硼氫化鈉以1∶2的摩爾比溶于乙醇中，氮氣保護下室溫反應1h，柱色譜分離，得到偶氮類色素半抗原V。

(5)將偶氮類色素半抗原V(a-e)與雙功能偶聯劑GMBS(N-[γ-馬來酰亞胺丁酰氧]琥珀酰亞胺酯)以1∶1的摩爾比溶于二氯甲烷中，4℃反應24h，蒸除二氯甲烷，得到活化酯VI。

(6)將偶氮類色素活化酯VI與牛血清蛋白BSA以15∶1-30∶1的摩爾比溶于磷酸生理鹽水(PBS)緩沖溶液中，4℃下攪拌反應6-7h。透析，高速離心，凍干上清液，得到偶氮類色素免疫抗原。

通過本研究，我們形成了制備偶氮類色素半抗原及其抗原的通用路線，為制備此類色素的相關抗體以及進一步發展快速檢測方法奠定了基礎。

【附圖說明】

圖1是偶氮類色素抗原VII(a-e)的合成路線。

【具體實施方式】

下面結合實施例進一步描述本發明，但不以任何方式限制本發明的范圍。

實施例1

100ml的圓底燒瓶中加入2.0g(4.4mmol)酸性橙II，25ml無水甲苯，電磁攪拌下緩慢加入2.0ml(28.1mmol)二氯亞砜，再滴入幾滴無水DMF，回流2h后停止反應。旋蒸除去剩余的二氯亞砜與甲苯，水洗，抽濾，紅外燈下烘干，得酸性橙II酰氯IIb。

實施例2