[發明專利]快速測定白芍中三種芍藥苷類化合物含量的方法

無效

• 申請號: 201110321308.2
• 申請日: 2011-10-20
• 公開（公告）號: CN102495143A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 王瑞;黃山君;王崢濤;石燕紅;楊莉;楊娜
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

技術領域

本發明涉及快速測定白芍中三種芍藥苷類化合物含量的方法，屬于中藥技術領域。

背景技術

中藥白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia?Lactiflora?pall.的干燥根，具有養血調經、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽之功效。芍藥苷類化合物是白芍中公認的主要活性成分，目前對白芍的質量主要是根據芍藥苷含量高低進行控制(2010版《中國藥典》(一部)，國家醫藥科技出版社：96)。

在白芍的使用過程中，硫磺熏蒸作為一種傳統的中藥材養護方法，其目的是為了讓飲片更加美觀、在儲藏過程中防蟲防霉、加快飲片的干燥速度等，具有干燥、增白、防蟲、防腐和防霉變等作用，在中藥材及飲片的加工貯藏過程中應用普遍。雖然硫磺熏蒸對中藥材及飲片的加工貯藏起到了一定的積極作用，但現代研究證明硫磺熏蒸后中藥材及飲片的性狀多有改變，并且會使其中殘留大量的二氧化硫及砷、汞等重金屬，對人體具有多種危害；由于二氧化硫是一種強還原劑，可能與中藥材中含有酮基、羥基的成分發生化學反應，導致有效成分的損失，因此可能改變藥物的性味，降低藥物的療效，從而直接影響中藥材和飲片的質量(參見程明等，硫磺熏制在中藥材加工和貯藏中的應用探討[J]，中國中醫藥信息雜志，2010年，17(5)：18)。國家食品藥品監督管理局在2004年曾發文指出硫磺熏蒸的中藥材為劣質藥材。《中國藥典》2005年版(一部)也取消了山藥、葛根等中藥材的硫熏工藝，并在《中國藥典》2008年版增補本中增加了二氧化硫殘留量的檢測。目前對于中藥材及飲片的加工貯藏已不再建議使用硫磺熏蒸的方法。

但是，硫磺熏蒸在白芍藥材與飲片的生產加工過程中仍在使用，近年來尤為嚴重，市場上流通的白芍藥材和飲片大多經硫磺熏制。由于產地、加工方法的差異，其中芍藥苷的含量差異極大，且產生芍藥苷亞硫酸酯等新化學成分，(參見王巧等，加工炮制對白芍化學成分的影響[J]，中國中藥雜志，2006年，31(17)：1418)，已嚴重影響了白芍藥材和飲片的質量。

我國在白芍中包括上述三個化合物的8組分含量測定已有文獻報道(參見王巧等，加工炮制對白芍化學成分的影響[J]，中國中藥雜志，2006年，31(17)：1418)，但這些方法均耗時長，成本高，不適合常規分析。目前尚無針對白芍中三種主要芍藥苷類化合物，即芍藥苷亞硫酸酯、芍藥苷和芍藥內酯苷，進行快速含量測定的方法。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供一種快速測定白芍中三種芍藥苷類化合物含量的方法。

本發明通過如下技術方案實現：

一種快速測定白芍中三種芍藥苷類化合物含量的方法，其特征是包括如下步驟：

(1)對待測樣品進行預處理；

(2)通過高效液相色譜法或超高效液相色譜法測定經預處理后的樣品中芍藥苷亞硫酸酯、芍藥苷和芍藥內酯苷的含量。

所述步驟(1)中樣品的預處理，是用80％甲醇超聲(超聲條件：功率240W，頻率45Khz)提取30-45分鐘。

所述步驟(1)中樣品的預處理方法：精密稱取待測樣品粉末，精密加入80％甲醇，超聲提取30分鐘(功率240W，頻率45Khz)，放冷，再稱定重量，用等濃度甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液。

上述預處理的待測樣品是白芍藥材和包括硫磺熏蒸在內的白芍飲片。

80％甲醇是質量濃度。

所述步驟(2)中高效液相色譜法或超高效液相色譜法的色譜條件為：采用C18柱，紫外檢測，流動相由A相和B相組成，A相為100％乙腈，B相為磷酸水溶液，采用等度洗脫。

所述C18柱的粒徑為1.7～5.0μm，柱內徑2.1～4.6mm，柱長為5～25cm；所述紫外檢測器的檢測波長為230nm；B相的濃度為0.02％～0.03％；A相∶B相體積比為13％～15％∶85％～87％，流速為0.3～1.0ml/min。

B相的濃度最佳為0.02％，體積比最優選為85％。

C18柱為SHISEIDO?CAPCELL?PAK?C18柱，或Waters?ACQUITY?UPLC?BEH?C18柱。

本發明的優點是：

(1)本發明方法為首次應用于白芍藥材、硫磺熏制白芍中芍藥苷亞硫酸酯、芍藥苷和芍藥內酯苷的同時檢測與分析。芍藥苷和芍藥內酯苷是白芍中的主要有效成分，而芍藥苷亞硫酸酯是在硫磺熏制過程產生的新化合物。該方法對白芍中芍藥苷類成分的檢測具有重要指導意義，對新藥等關鍵技術有良好的指導意義，可應用于新藥研發質控等多個方面。