[發(fā)明專利]一種從蜂王漿中提取10-羥基-2-癸烯酸的工藝

無效

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• 申請日: 2011-10-15
• 公開（公告）號: CN103044240A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張其安;楊少波
• 申請（專利權(quán)）人: 山東華康蜂業(yè)有限公司
• 主分類號: C07C59/42
• 分類號: C07C59/42;C07C51/48;C07C51/47
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種從蜂王漿中提取10-羥基-2-癸烯酸的工藝，特別是一種大孔吸附樹脂吸附層析法提取癸烯酸的工藝。

背景技術(shù)

蜂王漿又名蜂皇漿，是由11～21日齡的青年工蜂下咽頭腺和大顎腺分泌的，主要用于飼喂蜂王和幼蟲，呈乳白色、淡黃色或淺橙色半透明為粘稠漿狀，具有特殊香味、味酸、澀、辛、略甜，富含蛋白質(zhì)、糖類、脂肪酸、維生素、游離氨基酸等生理活性物質(zhì)。蜂王漿具有活化細(xì)胞、促使傷口愈合、促進(jìn)內(nèi)分泌、增加食欲、增強(qiáng)體力、防治骨質(zhì)疏松、防衰老、安神、抗菌、抗癌、抗輻射等多種生理活性作用，具有極高的醫(yī)藥和保健價(jià)值。10-羥基-2-癸烯酸(10-Hydroxy-2-Decenoic?acid，10-HDA)又稱王漿酸，是蜂王漿中主要的活性成分，是德國科學(xué)家D.J朗格于1921年首次在工蜂上顎腺中發(fā)現(xiàn)的。1957年，A.Butenandt首先報(bào)道從蜂王漿中分離得到10-HAD。此后，國內(nèi)外學(xué)者從性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、藥理及測定方法等方面對10-HAD進(jìn)行了較為深入的研究。10-HAD是一種不飽和脂肪酸，分子式為HO-CH₂-(CH₂)₆-CH＝CH-COOH(C₁₀H₁₈O₃)，分子量186.25，白色絮狀結(jié)晶或針狀結(jié)晶，不易吸潮，在高溫條件下易變?yōu)橛蜖罨蚪够蜏乩鋬龈稍飼r(shí)不易升華。熔點(diǎn)為64℃，溶于甲醇、乙醇、乙醚和氯仿，微溶于丙酮，難溶于水。對石蕊試紙顯酸性，能使溴水和高錳酸鉀溶液迅速褪色，對三氯化鐵不顯紫色。

研究表明，10-HAD對人和動(dòng)物具有多方面的藥理作用。第一，抑菌殺菌作用，10-HAD對金黃葡萄球菌、鏈球菌、變形桿菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、結(jié)核桿菌星狀癬菌、表皮癬菌等具有抑菌殺菌作用，10-HAD對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃葡萄球菌的最低以菌濃度(MIC)分別為0.625mg/mL、1.25mg/mL、2.5mg/mL；第二，抗癌、抗腫瘤作用，10-HAD可通過刺激環(huán)狀-腺磷苷的合成，使蛋白質(zhì)螺旋結(jié)構(gòu)和氨基酸序列正常化，從而使受腫瘤破壞的結(jié)構(gòu)正?；蚨鴮Π┘?xì)胞具有抑制作用；第三，抗輻射作用，10-HAD具有保護(hù)和修復(fù)蛋白質(zhì)、DNA、RNA的作用，所以它能對急性輻射損傷起到防治作用；第四，降血脂作用，10-HAD能減少飯后脂肪堆積，防止脂類物質(zhì)的合成，是改善血液中脂肪含量的一部分因素，對高血脂癥具有良好的治療作用。

10-HAD作為一種擁有顯著生理活性的物質(zhì)，不僅可以直接作為藥物使用，而且還是食品、化妝品的添加劑，還可以用于合成香料和醫(yī)藥中間體，市場需求極大。迄今為止，已報(bào)道的10-HAD的提取方法主要有乙醇提取法、乙醚提取法、溶液沉淀結(jié)晶法、醇中沉淀結(jié)晶法及高效液相色譜法(HPLC)等。有機(jī)溶劑提取法不但過程復(fù)雜、工序繁瑣、回收率較低，而且獲得的10-HAD純度不高。HPLC法雖然可獲得純度較高的10-HAD，但是該方法不適于工業(yè)化生產(chǎn)。大孔吸附樹脂具有選擇性好、回收率高、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長、宜于構(gòu)成閉路循環(huán)、節(jié)省費(fèi)用等諸多優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明利用大孔吸附樹脂提取蜂王漿中的10-HAD，獲得的10-HAD純度高，而且具有回收率高、工藝流程簡單、對生物活性無損等特點(diǎn)，適用于10-HDA的工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種利用大孔吸附樹脂快速、無損的從蜂王漿中提取高純度10-HAD的方法。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為，用95％乙醇將蜂王漿稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，超聲振蕩提取，去離子水稀釋；提取液經(jīng)大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附；吸附樹脂裝柱，乙醇動(dòng)態(tài)洗脫，收集洗脫液中含10-HDA的組份；經(jīng)蒸發(fā)濃縮、冷凍干燥獲得純度≥92.5％的10-HDA。其具體過程如下：

a、將蜂王漿與一定比例的95％乙醇混合、振蕩混勻，置于超聲波中超聲提取15min，3000r/min離心5min，取上清。

b、將a步驟中獲得的上清液用4～5倍體積的去離子水稀釋后與大孔吸附樹脂X-5按一定比例混合，150r/min振蕩吸附3h～4h。

c、將吸附后的大孔吸附樹脂X-5裝入層析柱，先用3倍柱體積20％乙醇洗脫，去除部分雜質(zhì)，然后用濃度為75％～95％的乙醇解吸10-HDA，流速為1mL/min，核酸蛋白檢測器檢測波長為245nm，根據(jù)解吸曲線收集含10-HAD組份的解吸液。

d、將收集到的解吸液蒸發(fā)濃縮、然后冷凍干燥，所得到的干物即為10-HAD。

其中：