[發明專利]一種枯草芽孢桿菌PA105及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201110320105.1
• 申請日: 2011-10-20
• 公開（公告）號: CN102352330A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 王升平;印遇龍;李麗立;姚康
• 申請（專利權）人: 中國科學院亞熱帶農業生態研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;A61K35/74;A61P31/04;C12R1/125
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及飼料添加劑領域，更具體涉及一種枯草芽孢桿菌PA105，同時還涉及一種枯草芽孢桿菌PA105的制備方法，還涉及一種枯草芽孢桿菌PA105在養殖動物飼料添加劑中的應用。?

背景技術

集約化養殖過程中，動物由于環境條件變化容易產生各種應激，比如斷奶、天氣突然變化等，從而引起動物免疫力降低。一些致病菌，特別是腸道條件性致病菌，能迅速繁殖，進而引發相應的疾病，比如大腸桿菌、沙門氏菌等。目前，主要是通過在飼料中添加抗生素的方法來控制和減弱應激。抗生素補給后可以抑制仔豬腸道致病菌的生長繁殖、有利于有益菌的生長，從而維持腸道的正常微生物群落結構。然而，抗生素在飼料中的大量使用存在著嚴重的弊端，比如抗生素引起內源性感染和二重感染、耐藥菌株的產生、畜禽免疫力下降和畜產品及環境中殘留等，很多國家和地區都已經禁止使用抗生素。益生菌具有安全、無污染以及免疫增強功能等優點，成為抗生素替代品的首選，而芽孢桿菌更是益生菌中使用最廣泛的一種微生態制劑。?

精氨酸是目前發現的功能最多的氨基酸，是一種半必需或條件性必須氨基酸，在應激條件下屬于必須氨基酸。精氨酸作為多種物質(比如多胺和肌酸)的前體和一氧化氮(NO)合成的底物，在蛋白質合?成、增強免疫機能和抗應激等方面具有十分重要的作用。日糧中補給精氨酸能促進動物生長、增強動物抵抗力和抗應激能力。一些芽孢桿菌菌株能在體外和體內合成精氨酸，從而對促進動物生長、增強機體免疫和動物抗應激能力。?

充分發揮枯草芽孢桿菌的抑菌活性，同時結合精氨酸增強免疫和抗應激的活性，篩選得到抗菌活性強、且精氨酸產量豐富的芽孢桿菌菌株，對養殖業具有重要的現實意義。本專利篩選的菌株枯草芽孢桿菌PA105同時具有抗致病菌活性、增強免疫和抗應激功能，從而提高動物生產性能，維護機體健康。目前，結合枯草芽孢桿菌的抗菌活性和產精氨酸活性，在養殖動物的飲水和飼料中應用枯草芽孢桿菌PA105，尚未有報道。?

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PA105，該菌株具有顯著的抗菌功能，在體外發酵培養過程中能分泌精氨酸，能顯著提高動物血清中精氨酸水平，從而增強機體免疫、抗應激和促進動物生長。?

本發明的另一個目的是在于提供了一種枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PA105在養殖動物飼料添加劑中的應用，該菌株顯著優點為飼料中添加該菌株后能顯著提高動物血清中精氨酸和谷氨酸水平，促進動物生長，提高動物機體免疫力和抗應激能力。?

本發明的還有一個目的是在于提供了一種枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PA105在制備治療或預防大腸桿菌和/或沙門氏菌?藥物中的應用，所述菌株具有顯著的抗菌活性，可顯著抑制大腸桿菌、沙門氏菌等致病菌的繁殖。?

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：?

一種枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PA105的制備方法，其步驟是：?

第一步：所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PA105在Luria-Bertani(LB)固體培養基上在恒溫生化培養箱中進行劃線培養，培養溫度30-37℃，培養時間18-36h。LB固體培養基成分為：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化鈉10g、瓊脂粉15g、蒸餾水1000ml，PH值6.8-7.2。?

第二步：從第一步的LB固體培養基上挑取枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PA105單個克隆株至裝有100毫升Luria-Bertani(LB)液體培養基的500毫升錐形瓶中，在恒溫生化搖床中進行培養，培養溫度30-37，轉速150-225r/min，培養時間18-36h。Luria-Bertani(LB)液體培養基成分為：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化鈉10g、蒸餾水1000ml，PH值6.8-7.2；?

第三步：取第二步實驗所得到的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PA105液體發酵培養液，按照3-5％接種量，接種到10L發酵罐中，發酵條件為：裝液量4-7L培養基，發酵溫度25-40℃，PH值6.8-7.8，發酵時間18-36h，轉速，200-400r/min。?

2、本發明枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PA105抑菌活性檢查方法如下：?