[發明專利]一株從白蟻腸道內分離的固氮菌

無效

• 申請號: 201110318881.8
• 申請日: 2011-10-19
• 公開（公告）號: CN102363758A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發明（設計）人: 趙凱;周東坡;張小燕;郝妍
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/22
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

技術領域

本發明涉及一株固氮菌。

背景技術

白蟻Termite屬于節肢動物門昆蟲綱有翅亞綱等翅目的昆蟲，是較為古老的社會性害 蟲，主要以富含纖維素、半纖維素和木質素等木質材料為食，這種本領是靠其后腸內的 微生物的作用。Termite若喪失了腸道中消化木質素和纖維素的微生物的作用，就會因為 不能消化木材而死。

Termite屬于典型的寡氮營養型生物，其腸道固氮微生物的固氮作用是白蟻體內氮素 的主要來源。Termite腸道固氮菌及其代謝產物可能直接作為Termite生長的氮源，這 使Termite得以利用含氮極低的木質食物為生。固氮作用是Termite生命活動必不可 少的，可以通過破壞Termite的固氮系統，使Termite氮素營養不良而死亡，這不失 為是一種值得探索的防治白蟻方法與途徑。目前，對于Termite氮營養方面，還有許 多重要問題仍需作進一步研究，這不僅具有理論意義，而且也有一定的應用意義。

發明內容

本發明提供了一株從白蟻腸道內分離的固氮菌。

一株從白蟻腸道內分離的固氮菌，它為肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella?pneumoniae) HUB-IV-004，屬于克雷伯菌屬(Klebsiella)，已在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏地 址為武漢市武漢大學，保藏編號為CCTCC?NO：M?2011312，保藏日期為2011年9月15 日；它為革蘭氏陰性菌，呈短桿狀，長為2.0μm～2.2μm，寬為1.6μm～2μm，有莢膜； 在無氮培養基上形成乳白色半透明的圓形菌落，菌落邊緣整齊，表面濕潤不易挑取，培養 5d后有褐色色素產生。

本發明中一株從白蟻腸道內分離的固氮菌，它為肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella? pneumoniae)HUB-IV-004，其半固體穿刺試驗陰性、淀粉水解試驗陽性、脂肪水解試驗陰 性、明膠水解試驗陰性、H₂S試驗陽性、尿素試驗陽性、吲哚試驗陰性、甲基紅試驗陽性、 伏普試驗陽性、檸檬酸鹽試驗陽性、尿酶試驗陽性、蔗糖試驗產酸產氣、麥芽糖試驗產酸 產氣、D-山梨醇試驗產酸產氣、鼠李糖試驗產酸產氣、甘露醇試驗產酸產氣、乳糖試驗產 酸產氣、海藻糖試驗產酸產氣，最適生長溫度為37℃，最適合生長pH為7.0±0.2。

本發明一株從白蟻腸道內分離的固氮菌，它為肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella?pneumoniae) HUB-IV-004，經16S?rDNA測序其基因序列與GenBank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)數 據庫中已知細菌16S?rDNA基因序列進行比對，獲取相近典型菌株的基因序列；利用 MEGA4.1和Clustal?X軟件繪制固氮菌株HUB-IV-004的系統進化樹，菌株HUB-IV-004與 K.pneumoniae?342菌株的親緣關系最近，比對后相似性達99％；結合菌株HUB-IV-004形 態學觀察、生理生化試驗鑒定結果，確定菌株HUB-IV-004為克雷伯菌屬(Klebsiella)的 一個新菌株，命名為肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella?pneumoniae)HUB-IV-004。

本發明一株從白蟻腸道內分離的固氮菌，它為肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella?pneumoniae) HUB-IV-004，屬于克雷伯菌屬(Klebsiella)，已在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏地 址為武漢市武漢大學，保藏編號為CCTCC?NO：M?2011312，保藏日期為2011年9月15 日。

本發明從白蟻腸道內分離固氮菌株，并采用分子生物學方法對其進行鑒定，并結合生 理生化特性等對其進行分類學鑒定，確定其種類地位，本發明肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella? pneumoniae)HUB-IV-004，屬于克雷伯菌屬(Klebsiella)，它作為指示菌，可以被樹木內 生菌發酵產物所抑制，從而破壞白蟻的固氮系統，白蟻氮氮素營養不良而死亡，達到防 治白蟻的目的，同時開發了可利用的固氮微生物資源及篩選，對開發人畜無毒、環保的 殺白蟻生物藥劑具有重要的理論意義和現實意義。

附圖說明

圖1為具體實施方式一中16S?rDNA?PCR擴增產物電泳圖，其中M：DNA?Marker? DL2000，Lane?1：HUB-IV-004?16S?rDNA擴增片段；