[發明專利]殺蠐螬類害蟲的蘇云金芽孢桿菌新菌株及其殺蟲蛋白

有效

• 申請號: 201110318767.5
• 申請日: 2011-10-19
• 公開（公告）號: CN102329760A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 李長友;鄭桂玲;耿以龍;周洪旭;張媛;初立良
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C07K14/325;A01N63/02;A01P7/04;C12R1/07
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 張中南

技術領域

本發明屬于害蟲生物防治技術領域，具體涉及一種殺蠐螬類害蟲的蘇云金芽孢桿菌新菌株及其殺蟲蛋白，即蘇云金芽孢桿菌新菌株B-Y7-1及其殺蟲蛋白。

背景技術

蠐螬是鞘翅目金龜甲總科幼蟲的通稱，為害各種農作物、果樹、林木和牧草等植物，是地下害蟲中種類最多、分布最廣和為害最重的一大類群，也是國內外公認的難防治的土棲性害蟲。據調查統計，植物地下部分受害的86％是由蠐螬危害造成的。每年全國蠐螬發生面積約1億畝，嚴重年份曾達3億2千萬畝，產量損失達20％～40％，全國尤以黃淮流域受害最為嚴重。我國已經記載的蠐螬種類有100余種，其中常見的有30余種，其中以華北大黑鰓金龜(Holotrichia?oblita?Faldermann)、暗黑鰓金龜(Holotrichia?parallela?Motschulsky)、銅綠麗金龜(Anomala?corpulenta?Motschlsky)等發生普遍而嚴重。在蠐螬的防治上化學農藥發揮了一定的作用，但化學農藥易造成嚴重的環境污染和生態平衡的破壞，同時化學農藥在食物中的殘留和累積，不僅危害人體健康，而且不利于社會的可持續發展。而生物防治具有不污染環境、對人畜安全和害蟲不易產生抗性等優點，因此，開發新的生物防治技術是當前害蟲綜合治理亟待解決的問題。

蘇云金芽孢桿菌(Bacillus?thuringiensis，簡稱Bt)是一種分布極其廣泛的革蘭氏陽性細菌，它在形成芽孢的同時，能產生對多種昆蟲、螨類和原生動物等具有特異活性的蛋白性質的伴孢晶體，由于其殺蟲晶體蛋白(Insecticidal?crystal?proteins，簡稱ICPs)對目標害蟲高效專一，對非靶標生物安全和對環境無污染。因此，Bt已廣泛用于防治農林、倉貯和衛生等方面的害蟲，是目前國內外產量最大、應用范圍最廣的微生物殺蟲劑，其殺蟲晶體蛋白也是目前應用最為廣泛和最有潛力的一類抗蟲蛋白。20世紀80年代以前，有關Bt的研究和應用大多集中在對鱗翅目害蟲的防治上，自Ohba等(1992)篩選獲得了一株對多種金龜子幼蟲具有特異殺蟲活性的Bt新菌株Buibui后，近年來對金龜子類幼蟲具有活性的Bt菌株的研究和開發引起了人們的關注。目前國際上已相繼分離了一些殺金龜子類害蟲的Bt菌株，如馮書亮等(2000)分離了對黃褐麗金龜(Anomala?exoleta)和銅綠麗金龜等具有殺蟲活性的Bt分離株HBF-1，Yu等(2006)分離了對暗黑鰓金龜具有活性的菌株Btl85。但目前成功防治蠐螬類害蟲的Bt菌株及其產品數量還相對較少，因此，篩選分離出具有更高效殺蟲效果的蘇云金芽孢桿菌，發掘新型、高效和廣譜的殺蟲蛋白，對于蠐螬類地下害蟲的防治具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種殺蠐螬類害蟲的蘇云金芽孢桿菌新菌株及其殺蟲蛋白，即蘇云金芽孢桿菌菌株B-Y7-1，及其殺蟲晶體蛋白，以彌補現有技術的不足。

本發明的一個方面涉及蘇云金芽孢桿菌新菌株Bacillus?thuringiensisB-Y7-1，其于2011年7月26日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?No.M2011267。

本發明篩選的菌株，用于制備防治蠐螬類害蟲的活菌制劑。

本發明的另一個方面涉及一種從新菌株中分離的殺蟲晶體蛋白，其蛋白的氨基酸序列SEQ?ID?NO：1。

本發明的殺蟲蛋白用于制備防治蠐螬類害蟲的制劑。

本發明的菌株分離自山東省煙臺地區土壤，對蠐螬類害蟲具有特異性殺蟲活性，其殺蟲晶體蛋白與國內外報道的不同，作用對象也不相同，對我國主要地下害蟲華北大黑鰓金龜和暗黑鰓金龜均具有較好的防治效果。

附圖說明

圖1：本發明的蘇云金芽孢桿菌菌株B-Y7-1殺蟲晶體蛋白SDS-PAGE圖，

其中泳道1為蛋白分子量標準，泳道2為B-Y7-1。

具體實施方式

實施例1蘇云金芽孢桿菌菌株B-Y7-1的分離和生物學特性：

1.1土樣來源

土樣采集于山東省各地，選擇荒草地、林地等非耕地的土壤采樣，取地表以下5～10em土壤約50g，裝袋封口，編號并登記采集地點。

1.2培養基