[發(fā)明專利]針對免疫球蛋白Fc段的單域重鏈抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110318630.X
• 申請日: 2011-10-19
• 公開（公告）號: CN102399288A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陶勇;許楊;付金衡;涂追
• 申請（專利權(quán)）人: 山西德豐信成生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N1/15;C12N5/10
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及單域重鏈抗體技術(shù)（又稱為納米抗體技術(shù)），以及基因工程抗體技術(shù)，特別是涉及針對免疫球蛋白G（immunoglobulin?G，IgG?）Fc段（fragment?crystalline，F(xiàn)c）的單域重鏈抗體或多肽。

技術(shù)背景

重鏈抗體（Heavy-chain?antibody）是一種天然缺失輕鏈，僅由重鏈組成的抗體，存在于駱駝、鯊魚等動物中。單域重鏈抗體（又稱為納米抗體，VHH抗體，variable?domain?of?heavy?chain?of?heavy-chain?antibody）是指僅由重鏈抗體可變區(qū)（Variable?region）組成的基因工程抗體。與普通抗體相比，單域重鏈抗體具有分子量小，穩(wěn)定性高，水溶性好等優(yōu)點，目前已廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、醫(yī)學(xué)診斷和檢測、藥物研發(fā)等領(lǐng)域。

免疫球蛋白G（immunoglobulin?G，IgG）由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈組成。每條鏈都含有可變區(qū)（variable?region，V區(qū)）和恒定區(qū)（constant?region，C區(qū)），其中可變區(qū)提供抗原結(jié)合位點和特異性，恒定區(qū)構(gòu)成免疫球蛋白的框架，具有生物效應(yīng)功能。用木瓜蛋白酶消化IgG，可將其分成3個功能區(qū)，即2個相同的抗原結(jié)合片段（fragment?antigen?binding，F(xiàn)ab）和一個可結(jié)晶片段(fragment?crystalline，F(xiàn)c)。Fc段位于恒定區(qū)，由兩條重鏈羧基端的一半組成。由于Fc段遠離抗原結(jié)合部位，因此提供了一個與抗體結(jié)合而不影響抗原抗體反應(yīng)的區(qū)域，是最有效的二抗試劑結(jié)合的表位區(qū)。

目前，已有針對IgG??Fc段的多克隆抗體、單克隆抗體的公開報道。與單域重鏈抗體相比，這些抗體存在生產(chǎn)成本較高，制備過程繁瑣等缺點。單域抗體具備分子量小、穩(wěn)定性高、易于表達等性質(zhì)，具有廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明之目的是提供針對免疫球蛋白G的Fc段的單域重鏈抗體（包括含有所述單域重鏈抗體全部或部分功能區(qū)域的蛋白質(zhì)或多肽）及其氨基酸序列，可被用于制備檢測或純化、富集IgG的試劑和工具。

本發(fā)明提供一種針對免疫球蛋白G的Fc段的單域重鏈抗體，具有SEQ?ID?NO.:1所示的氨基酸序列，其氨基酸序列的IMGT編號和結(jié)構(gòu)域的劃分如圖1所示。

?本發(fā)明所提供的單域重鏈抗體包括4個框架區(qū)（Framework?region，F(xiàn)R）和三個互補決定區(qū)（Complementarity-determining?region,?CDR）。其中，框架區(qū)（FR1-FR4）分別選自SEQ?ID?NO.:2，SEQ?ID?NO.:4，SEQ?ID?NO.:6和SEQ?ID?NO.:8，互補決定區(qū)（CDR1-CDR3）分別選自SEQ?ID?NO.:3，SEQ?ID?NO.:5和SEQ?ID?NO.:7。互補決定區(qū)主要負責(zé)抗原的識別，框架區(qū)結(jié)構(gòu)相對穩(wěn)定，主要起著維持蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用。

本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)或多肽，其特征是包含SEQ?ID?NO.:2，SEQ?ID?NO.:4，SEQ?ID?NO.:6和SEQ?ID?NO.:8中的一個或者兩個以上的氨基酸序列，且至少與其中的一個氨基酸序列具有90%同源性。

本發(fā)明提供一種蛋白質(zhì)或多肽，其特征是包含SEQ?ID?NO.:3，SEQ?ID?NO.:5和SEQ?ID?NO.:7中的一個或者兩個以上的氨基酸序列，且至少與其中的一個氨基酸序列具有80%同源性。

本發(fā)明還提供了一種核酸分子，其特征是編碼SEQ?ID?NO.:1，SEQ?ID?NO.:2，SEQ?ID?NO.:3，SEQ?ID?NO.:4，SEQ?ID?NO.:5，SEQ?ID?NO.:6，SEQ?ID?NO.:7和SEQ?ID?NO.:8，通過遺傳密碼子可以隨時獲得該核酸分子的具體序列。

本發(fā)明所提供的核苷酸序列或部分序列可以通過合適的表達系統(tǒng)進行表達以得到相應(yīng)的蛋白質(zhì)或多肽。這些表達系統(tǒng)包括細菌，酵母菌，絲狀真菌，動物細胞，昆蟲細胞，植物細胞，或無細胞表達系統(tǒng)。

本發(fā)明還提供一種載體，包含所述核酸序列。由于遺傳密碼子具有簡并性，該核酸序列可以根據(jù)不同的應(yīng)用目的而不同。

本發(fā)明還提供一種宿主細胞，包含所述蛋白質(zhì)或多肽的表達載體。