[發明專利]人膀胱癌細胞系

無效

• 申請號: 201110315910.5
• 申請日: 2011-10-18
• 公開（公告）號: CN102344910A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 許傳亮;任善成;徐偉東;孫穎浩
• 申請（專利權）人: 許傳亮;任善成;徐偉東;孫穎浩
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所 31251
• 代理人: 張堅

技術領域

本發明屬于動物細胞系領域，具體涉及人膀胱癌細胞系。

背景技術

膀胱癌是最常見的泌尿系腫瘤之一，直接威脅患者的生存。世界范圍內，2008年膀胱癌新發病例386300，有150200例病人死于膀胱癌。在美國，2010年膀胱癌新發病病例70530，其中膀胱癌導致死亡的病例為14683。在我國，男性膀胱癌發病率位居全身腫瘤的第八位，女性排在第十二位以后.雖然發病率遠低于西方國家，但是近年來，我國部分城市腫瘤發病率報告顯示膀胱癌發病率有增高趨勢。

膀胱癌主要可以分為兩種類型：肌層浸潤和非肌層浸潤。70％-80％新確診的膀胱癌患者為非肌層浸潤癌，即使及時給予相關治療也會有50％-70％的復發率和10％-30％的患者進展為肌層浸潤癌。但是后者極易發生局部浸潤或者遠處轉移，雖然行全膀胱切除術和淋巴結清掃，病人也常常難以治愈，是導致病人死亡的主要原因。

目前，對包括膀胱腫瘤在內的惡性腫瘤的器官轉移的機制不明確，晚期腫瘤病人往往不宜手術，導致器官轉移癌標本難以獲取，轉移性腫瘤診療和機制研究也因此相對滯后。

為深入了解膀胱癌細胞的轉移機制，必須建立合適的研究模型。

目前普遍應用的人癌轉移模型，是人癌細胞接種于免疫缺陷動物體內所形成的動物模型(例如接種于裸鼠形成人癌裸鼠轉移模型)，以及能在免疫缺陷動物體內發生轉移的人癌細胞系。

目前在中國用于研究的膀胱癌細胞系存在以下問題：膀胱癌細胞系多來源于國外人群，因為種族差異性的存在，其能否代表我國膀胱癌的類型和特點存在疑問。

因此，發明人希望能夠建立一株來源于中國人的人膀胱癌細胞系，為研究膀胱癌轉移機制提供適宜的研究模型材料。

發明內容

本發明一方面提供了一種人膀胱癌細胞系，其保藏號為CCTCC?NO.C201180。

本發明另一方面提供了一種人膀胱癌轉移細胞系制備方法，該方法包括以下兩個步驟：(1)將權利要求1所述的人膀胱癌細胞系接種于模式動物體內轉移擴增成瘤后，取所形成的轉移瘤進行細胞培養；(2)再將步驟(1)培養后所得細胞接種于模式動物體內，轉移擴增后形成二次轉移瘤，取所形成的二次轉移瘤進行細胞培養來獲得所述的人膀胱癌轉移細胞系。

在本發明的一個具體實施方案中，所述的模式動物為裸小鼠或裸大鼠，優選的，模式動物為裸小鼠。

在本發明的另一個具體實施方案中，所述的步驟(1)和(2)的接種部位都為膀胱。

優選的，所述的人膀胱癌轉移細胞系為：腹膜后淋巴結轉移細胞系、肺門淋巴結轉移細胞系、肝臟轉移細胞系、腎上腺轉移細胞系或腎臟轉移細胞系。

本發明再一方面提供了一種人膀胱癌原位瘤細胞的制備方法，所述的人膀胱癌原位瘤細胞是通過將上述的保藏號為CCTCC?NO.C201180的人膀胱癌細胞系接種于裸小鼠的膀胱后擴增形成原位瘤后，取所形成的原位瘤進行細胞培養而獲得的。

附圖說明

圖1顯示了右腎上極轉移灶；

圖2顯示了髂淋巴結轉移灶；

圖3顯示了腹膜后淋巴結轉移灶；

圖4顯示了肝臟轉移灶。

具體實施方式

本發明的保藏號為CCTCC?NO.C201180的人膀胱癌細胞系的建系過程

原代細胞的獲得：

一名52歲女性患者，因血尿1月伴尿頻尿急來長海醫院就診，經檢查患有膀胱癌。膀胱鏡檢提示膀胱右側壁2cm×2cm占位，取活檢病理提示高級別尿路上皮癌(膀胱癌T2期)。之后進行了膀胱癌根治術(術前同患者及其家屬簽署術后標本用于科研的知情同意書)。

術后，取該患者的肌層浸潤癌組織約0.5×0.5cm，放入15ml離心管加入0.5％膠原酶IV2-3ml震蕩后37℃消化15min；充分消化后用1ml玻璃吸管反復吹打至無明顯組織塊后放入離心機700g離心5min。

棄上清，加入含10％胎牛血清的RPMI-1640培養液10ml和雙抗(青霉素和鏈霉素)100ul后吹打均勻放入兩個25cm²培養瓶中于37℃CO₂濃度為5％的美國Thermo二氧化碳孵養箱內培養，24小時后換液繼續培養。

2-3天換液一次，并用相差顯微鏡觀察上皮細胞和間質細胞生長狀態；(兩培養瓶中的上皮細胞呈不規則的多邊形和梭形，間質細胞呈長條形或繩索狀，二者均貼壁生長)；5天后相差顯微鏡下觀察時，發現細胞培養瓶底即出現大量細胞克隆(此時可見間質細胞和上皮細胞混雜生長)。