[發明專利]海洋魚類線粒體基因組控制區擴增引物及設計和擴增方法

有效

• 申請號: 201110315821.0
• 申請日: 2011-10-18
• 公開（公告）號: CN102409051A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 徐田軍;王日昕;程遠志;石戈;孫悅娜
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.海洋魚類線粒體基因組控制區擴增引物，其特征是由兩條單鏈寡核苷酸組成，其中輕鏈引物為如SEQ?ID?No.1所示的核苷酸序列；重鏈引物為如SEQ?ID?No.2所示的核苷酸序列。

2.如權利要求1所述的海洋魚類線粒體基因組控制區擴增引物，其特征是所述的海洋魚類包括眼斑擬石首魚、鰳魚、髯毛鰕虎魚、矛尾復蝦虎魚、大彈涂魚、斑尾刺蝦虎魚、黃鰭刺鰕虎魚、青彈涂魚、矛尾刺鰕虎魚、雙帶縞蝦虎魚、短尾大眼鯛、澳洲鯖、鯔魚、鱷鲬、小黃魚、大瀧六線魚、若鲹、廈門白姑魚、尖頭黃鰭牙?、帶魚、白姑魚、刺鯧、鱖魚、日本方頭魚、角木葉鰈、斑鰶、褐菖鮋、鳳鱭、鮸魚、棘頭梅童魚、黑鰓梅童魚、紅狼牙蝦虎魚、真鯛、橫帶髭鯛、斜帶髭鯛、條石鯛、二長棘鯛、黃姑魚、黃鰭棘鯛、金色小沙丁魚、黑鯛。

3.一種如權利要求1所述的海洋魚類線粒體基因組控制區擴增引物的設計方法，其特征是登錄NCBI網站中的GenBank數據庫搜索已測定的海洋魚類線粒體基因組的tRNA-Thr和tRNA-Phe基因序列，經同源性比較，找到保守序列，并利用Premier?Primer5.0軟件設計出海洋魚類線粒體基因組控制區擴增引物。

4.一種對海洋魚類線粒體基因組控制區進行擴增的方法，其特征是采用如權利要求1所述的海洋魚類線粒體基因組控制區擴增引物對待測樣品的DNA模板溶液進行PCR擴增。

5.如權利要求4所述的一種對海洋魚類線粒體基因組控制區進行擴增的方法，其特征是PCR擴增的條件為：94℃預變性5min，然后94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸60s，共30個循環，最后72℃延伸5min。

6.如權利要求4所述的一種對海洋魚類線粒體基因組控制區進行擴增的方法，其特征是PCR擴增的反應體系組成為：PCR反應體系為25μL，內含dNTP?2μL、Pfu?DNA聚合酶?Buffer?2.5μL、10μmol的輕鏈引物和重鏈引物各1μL、Pfu?酶?1μL、含100ng的DNA模板溶液?1μL及ddH₂O?16.5μL。

7.如權利要求4所述的一種對海洋魚類線粒體基因組控制區進行擴增的方法，其特征是所述的待測樣品來自包括眼斑擬石首魚、鰳魚、髯毛鰕虎魚、矛尾復蝦虎魚、大彈涂魚、斑尾刺蝦虎魚、黃鰭刺鰕虎魚、青彈涂魚、矛尾刺鰕虎魚、雙帶縞蝦虎魚、短尾大眼鯛、澳洲鯖、鯔魚、鱷鲬、小黃魚、大瀧六線魚、若鲹、廈門白姑魚、尖頭黃鰭牙?、帶魚、白姑魚、刺鯧、鱖魚、日本方頭魚、角木葉鰈、斑鰶、褐菖鮋、鳳鱭、鮸魚、棘頭梅童魚、黑鰓梅童魚、紅狼牙蝦虎魚、真鯛、橫帶髭鯛、斜帶髭鯛、條石鯛、二長棘鯛、黃姑魚、黃鰭棘鯛、金色小沙丁魚、黑鯛的海洋魚類。