[發明專利]一種日落黃色素半抗原與人工抗原的合成方法無效

申請號：	201110315451.0	申請日：	2011-10-18
公開（公告）號：	CN102504572A	公開（公告）日：	2012-06-20
發明（設計）人：	王文虎;徐鳳波;劉亭亭;任新霞;周秀秀;趙秀杰;宋英俊;李可慶;章奉良	申請（專利權）人：	江蘇南通維立科化工有限公司;南開大學
主分類號：	C09B43/00	分類號：	C09B43/00;C07K14/765
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種日落黃色素半抗原人工抗原合成方法
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【說明書】：

【技術領域】

本發明涉及偶氮類色素衍生物，尤其涉及一種日落黃色素半抗原及其人工抗原的制備方法，屬于有機合成領域。

【背景技術】

食用色素作為常用的食品添加劑，由于可使食物本身的顏色變的鮮艷，受到廣大消費者的青睞，也成為食品行業大力使用的添加劑。食用色素使用較多的是食用合成色素，且大多為偶氮類色素。我國對在食品中添加合成色素也有嚴格的限制：凡是肉類及其加工品、魚類及其加工品、醋、醬油、腐乳等調味品、水果及其制品、乳類及乳制品、嬰兒食品、餅干、糕點都不能使用人工合成色素。只有汽水、冷飲食品、糖果、配制酒和果汁露可以少量使用，一般不得超過1/10000。一般情況下，偶氮類色素本身不會對人體產生有害影響，但是在體內還原分解，可形成芳香胺化合物，芳香胺在體內經過代謝活動后與靶細胞作用可能使DNA發生變化，成為人體病變的誘發因素，對人體或動物有潛在的致癌性和致突變性。由于其致癌性和致突變性，世界上很多國家都對偶氮類染料的使用實施了嚴格的規定。瑞典、芬蘭、挪威、印度、丹麥、法國等早已禁止使用偶氮類色素，其中挪威等一些國家還完全禁止使用任何化學合成色素。

日落黃，英文名稱：Sunset?Yellow，是由對氨基苯磺酸重氮化，與2-萘酚-6-磺酸偶合，經精制而得。雖是我國批準使用的食品添加劑，但在我國存在嚴重地超限量和超范圍使用，對人民群眾的身體健康造成嚴重威脅，加重了我國的食品安全問題。因此，加強日落黃以及類似色素檢測方法的研究具有重要意義。

目前日落黃的檢測方法僅限于高壓液相法、質譜法等儀器方法，雖準確、穩定、可靠，可作為標準方法，但價格昂貴，費時較長，需要大型儀器設備，并且需要專門的技術人員，所以難于用于現場操作。而酶聯免疫檢測法(ELISA)具有靈敏、快速、簡便、特異性好、樣品需求量少、對昂貴儀器以及專業操作人員的依賴程度較低等優點，非常適于現場監控和樣品的批量檢測。但國內外尚未有針對日落黃的殘留免疫檢測方法的報道。為彌補這一空白，有必要設計和制備出日落黃相應的半抗原以及與載體蛋白相連的人工抗原，在此基礎上建立相關的酶聯免疫檢測方法。

【發明內容】

本發明的目的在于提供一種偶氮類色素日落黃半抗原及人工抗原的合成方法。

本發明所涉及的日落黃，其結構式為：

日落黃

本發明的技術方案如下：

(1)將日落黃與二氯亞砜以1∶6-1∶7的摩爾比溶在甲苯中，加熱回流反應2h后停止。旋蒸除去剩余的二氯亞砜與甲苯，得到雙磺酰氯(化合物I)。

(2)將雙磺酰氯I與氨基酸甲酯(甘氨酸甲酯、丙氨酸甲酯、纈氨酸甲酯、亮氨酸甲酯、異亮氨酸甲酯、苯丙氨酸甲酯、蛋氨酸甲酯)以1∶3的摩爾比溶于丙酮中，在6倍量堿(三乙胺、吡啶、氫氧化鈉、碳酸鉀)的作用下室溫反應，蒸除丙酮，柱色譜分離，得到日落黃衍生物IIA。

(3)將日落黃衍生物II溶于甲醇NaOH溶液中，30℃下反應0.5h。調節PH為酸性，抽濾，烘干，得到日落黃衍生物IIIA。

(4)所用氨基酸甲酯為對氨基苯甲酸甲酯時，重復步驟2和3，得到日落黃衍生物IIIB。

(5)所用氨基酸甲酯為3-氨基丙酸甲酯、4-氨基丁酸甲酯、5-氨基戊酸甲酯、6-氨基己酸甲酯時，重復步驟2和3，得到日落黃衍生物IIIC。

(6)將NHS和DCC以1∶1的摩爾比溶于二氯甲烷中，再將日落黃衍生物III加入到NHS和DCC的混合溶液中，4℃反應24h，旋蒸除去二氯甲烷，得到活化酯。

(7)將日落黃活化酯和牛血清蛋白BSA以15∶1-30∶1的摩爾比溶于磷酸生理鹽水(PBS)緩沖液中，4℃下攪拌反應6-7h。透析，高速離心，凍干上清液，得到日落黃免疫抗原。