[發(fā)明專利]預防西尼羅河病毒的重組假型桿狀病毒Bac-G-prM/E及疫苗與應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110314717.X
• 申請日: 2011-10-17
• 公開（公告）號: CN103045544A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設計）人: 曹勝波;朱碧波;徐敏;葉靜;楊曉紅;陳龍;陳煥春;錢平;肖少波
• 申請（專利權）人: 華中農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

技術領域

本發(fā)明屬于動物病毒學和動物基因工程技術領域。具體涉及一種表達西尼羅河病毒prM/E蛋白的重組假型桿狀病毒株的構建、用該重組病毒制備的疫苗及其在預防西尼羅河病毒中的應用。

背景技術

西尼羅河熱(West?Nile?Fever，簡稱WNF)是由西尼羅河病毒(West?Nile?Virus，WNV)感染引起的人和多種動物共患的急性傳染病。1937年，WNV首次在兩尼羅河地區(qū)一個發(fā)燒的烏干達婦女血液中分離出來，并命名為西尼羅河病毒。1999年美國出現(xiàn)疫情，并于隨后幾年迅速擴散至全美大部分地區(qū)，導致兩萬多人感染，數(shù)百人死亡(Nash?D.F等，The?outbreak?of?West?Nile?virus?infection?in?the?New?York?City?area?in?1999.N.Engl.J.Med.2001，344：1807-1814)，一度引發(fā)世界性恐慌。目前，該病還沒有有效的疫苗進行免疫預防。迄今為止，中國尚未發(fā)現(xiàn)WNV感染的臨床病例，但是中國的氣候、地里環(huán)境復雜，蚊蟲種類繁多，具備傳播條件，隨著國際交流的日益頻繁，WNV傳人中國境內(nèi)的可能性非常大。因此，開展該病的疫苗研究，對于WNV的預防具有重要的意義。

WNV是不分節(jié)段的單股正鏈RNA病毒，是一種B群蟲媒病毒，病毒核殼外面包裹著脂質(zhì)雙層膜，膜內(nèi)鑲嵌有前膜蛋白(premembrine?protein，PrM)和包膜蛋白(envelope?protein，E)。E蛋白是WNV重要的結構蛋白，屬糖蛋白，具有血細胞凝集素活性，并介導病毒與宿主細的粘附和膜融合，是重要的毒力因子；而且具有很強的免疫原性，可誘發(fā)機體產(chǎn)生病毒中和抗體，逃避宿主免疫監(jiān)督系統(tǒng)的攻擊。而prM蛋白對于E蛋白的正確折疊和切割具有重要作用(Beasley?D.W等，Identification?of?neutralizing?epitopes?within?structural?domain?III?of?the?West?Nile?virus?envelope?protein.J.Virol.2002，76：13097-13100.)。因此，prM/E基因作為WNV的主要免疫原性基因，是研制WNV新型疫苗的主要候選基因。Naohiro?Ohtaki選用CHO細胞系穩(wěn)定的持續(xù)性共表達WNV的M前體蛋白(prM)和E蛋白形成VLPs(virus-like?particles)，這種大量表達的VLPs蛋白作為免疫原能保護小鼠抵抗WNV(Naohiro?Ohtaki等，Immunogenicity?and?efficacy?of?two?types?of?West?Nile?virus-like?particles?different?in?size?and?maturation?as?a?second-generation?vaccine?candidate.Vaccine.2010，28：6588-6596)。Arroyo?J等利用黃熱病毒YFV-17D作為載體將WNV的prM/E蛋白閱讀框取代黃熱病毒自身的蛋白，構建嵌合疫苗(Arroyo?J等，Chimeri-vax-West?Nile?virus?live?attenuated?vaccine：preclinical?evaluation?of?safety，immunogenicity?and?efficacy.J?Virol.2004.78：497-507.)。這種嵌合疫苗產(chǎn)生了很好的免疫效果，但是這種重組的病毒有可能產(chǎn)生未知的病原特性，不利于實時監(jiān)控。徐敏等應用慢病毒載體包裝表達WNV?prM/E基因的假病毒，并通過轉(zhuǎn)導哺乳動物細胞證明該基因可以在轉(zhuǎn)導細胞中穩(wěn)定表達，從而為基于慢病毒載體的WNV新型疫苗開發(fā)奠定基礎(徐敏等，慢病毒載體介導的西尼羅河病毒prME蛋白的表達，中國獸醫(yī)科學，2010，40：778-782)。