[發明專利]核酸擴增反應設備、方法及用于核酸擴增反應設備的基板

無效

• 申請號: 201110312670.3
• 申請日: 2011-10-14
• 公開（公告）號: CN102703309A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 小島健介;梶原淳志
• 申請（專利權）人: 索尼公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 余剛;吳孟秋

技術領域

本發明涉及核酸擴增反應設備、用于核酸擴增反應設備的基板以及核酸擴增反應方法，具體地，涉及一種包括用于將用作核酸擴增反應的反應場的反射區域內的側光反射的反射部件的核酸擴增反應設備。

背景技術

擴增特定核酸的技術，例如聚合酶鏈反應(PCR)，被應用在生物技術的各個領域。通常，諸如PCR的核酸擴增反應需要檢查目標核酸是否是被特異性擴增的步驟。例如，存在通過利用例如聚合酶的凝膠對用于諸如PCR的核酸擴增反應的反應液體進行凝膠電泳，然后對PCR擴增獲得的DNA片段染色來進行檢查的方法。

此外，例如下列相關技術方法也用作用于檢查核酸擴增反應中的核酸擴增的方法：通過測量用于核酸擴增反應的反應液體的渾濁度來檢查擴增的方法；使用包括與用作擴增對象的核酸特異性偶聯的探針的微陣列的方法；以及通過使用與雙鏈DNA偶聯的熒光標記探針或與目標PCR產物特異性偶聯的熒光標記探針實時檢查擴增的實時PRC。

諸如PCR的核酸擴增反應還用于分析例如單核苷酸多態性(SNP)，并采用上述用于檢查核酸擴增的方法。

已經提出了一種分析方法，即，通過使用于野生型的引物和一種或兩種用于變異型的引物同時或分開地與DNA聚合酶一起作用于包括用作分析對象的SNP部位染色體或其片段上，以基于引物檢查是否存在伸長，并且，電泳用作檢查擴增的核酸的方法。

此外，已經提出了一種SNP分析方法，即，通過利用用于包括SNP部位的基準序列和用于變異型序列的兩種特異性引物和通用引物來擴增目標序列部分，并通過對獲得的反應液體進行電泳來檢查是否存在擴增產物。然而，電泳花費太長的時間并且有污染影響。

另一方面，已經提出了一種通過使用分析對象基因組DNA和多對引物擴增包括SNP部位的核酸來進行分型的方法。利用用于獲得的擴增產物的標記探針等，通過例如雜交進行該分型。

如果能快速簡便地進行SNP分析，則例如能夠實現在患者病床邊等做出最佳的治療方法、用藥方法等的個性化醫療，并建立起符合要求的定點護理(POC)技術。為了這個目的，期望一種在核酸擴增反應后更加迅速簡便地檢查核酸擴增的方法。

對于利用標記有熒光物質的雜交探針檢測核酸的方法，例如核酸量化法(實時PCR)以及用于檢測諸如單核苷酸多態性(SNP)的變異體的方法(熔解曲線分析)是已知的。

其熒光強度在雜交狀態(也包括雜交后被切斷的狀態)和游離狀態之間變化的探針用作這些方法中所使用的熒光標記雜交探針，并通過測量該變化來進行檢測。這種探針的代表是使用熒光共振能量轉移(FRET)的探針和TagMan^TM探針，而分子信標已知為這種探針的示例。

在使用FERT的探針中，需要使用兩種熒光染料：報告基團染料和淬滅染料。這樣，探針的設計就非常復雜。

因此，已知的是利用標記有熒光染料的核酸探針與目標核酸雜交時熒光染料的發出光減弱的現象并為了更容易地量化核酸而使用一種熒光染料的核酸探針(參照日本專利公開第2005-261354號和日本專利公開第2002-119291號)。此外，對于標記有350、488、568；以及Cy3的探針來說，還已知的是，在雜交標記探針時，一些情況下熒光染料的發出光增強(參照Marras?SAE、Kramer?FR和TyagiS.(2002)，Nucleic?Acids?Research，30，e122)。

下面的方法被認為是不使用電泳凝膠、諸如膜的支撐體以及標記物質的檢測方法。

例如，已知的有，使偏振光穿過核酸擴增反應液體并測量旋光性和圓偏振光的二色性的方法(參照日本專利公開第2002-186481號)以及感測伸長的擴增產物的偏振光成分的變化的方法(參照日本專利公開第2002-171997號、日本專利公開第2002-171998號以及日本專利公開第2002-171999號)。

例如，已知的有，觀察由于隨著擴增反應的進行所產生的焦磷酸和鎂導致的不溶物質的沉淀的方法(參照國際專利公開WO?01/83817說明書(brochure))。此外，已知的有，用含有氧化酶的酶反應試劑處理作為擴增產物的焦磷酸且氧化酶作用時發生的電子轉移在電化學活性插入劑存在的情況下被擴增，從而被電化學檢測為電流的方法(參照日本專利公開第2003-299號和日本專利公開第2003-47500號)。另外，已知的有，基于核酸擴增反應中脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)和焦磷酸間偶聯能力的不同，通過金屬指示劑感測反應液體中金屬離子量的變化來檢測是否存在核酸擴增的方法(日本專利公開第2004-283161號)。