[發明專利]米黑根毛霉菌株及其在制備β-葡聚糖酶和凝乳酶中的應用

有效

• 申請號: 201110312302.9
• 申請日: 2011-10-14
• 公開（公告）號: CN103045485A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 江正強;唐艷斌;崔健;閆巧娟;楊紹青
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/24;C12N9/64;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.米黑根毛霉(Rhizomucor?miehei)CAU432，其保藏編號為CGMCC?No.4967。

2.用于培養權利要求1所述米黑根毛霉的培養基，由碳源、氮源、無機鹽和水組成；所述碳源為如下物質中的至少一種：甘蔗皮、玉米苞皮、玉米桿、燕麥、麥麩、甘蔗渣、玉米芯、啤酒酒糟、稻殼、可溶性淀粉、幾丁質、高粱桿、白酒酒糟、麩皮、稻草和葡萄糖；所述氮源為如下物質中的至少一種：酵母提取物、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、牛肉膏蛋白胨、豆粕粉、黃豆粉、脫脂奶粉、蛋白胨、尿素、磷酸氫二銨、硫酸銨、酵母提取物和胰蛋白胨等質量混合得到的酵母蛋白胨混合物、硝酸銨和大豆蛋白胨；所述無機鹽為如下物質中的至少一種：KH₂PO₄、MgSO₄和CaCl₂。

3.如權利要求2所述的培養基，其特征在于：所述培養基由所述碳源、所述氮源、KH₂PO₄、MgSO₄、CaCl₂和水組成；

所述培養基優選為如下(a)至(d)中任一所述的培養基：

(a)將所述碳源10g-50g、氮源10g、KH₂PO₄?5g、MgSO₄·7H₂O?0.3g和CaCl₂?0.3g溶于水并用水定容至1L得到的培養基；

(b)將所述碳源和基礎培養液甲混合得到的培養基；所述基礎培養液甲的制備方法為：將所述氮源10g、KH₂PO₄?5g、MgSO₄·7H₂O?0.3g和CaCl₂?0.3g溶于水并用水定容至1L得到的培養基；所述培養基的初始含水量為70-90％；

(c)將所述碳源、所述氮源和基礎培養液乙混合得到的培養基；所述基礎培養液乙的制備方法為：將CaCl₂?0.3g、KH₂PO₄?5g、MgSO₄·7H₂O?0.3g和吐溫-80?0.34g溶于水并用水定容至1L；所述培養基的初始含水量為30-75％；所述碳源和所述氮源的質量比為5∶1；

(d)將所述碳源10g-50g、所述氮源10g、KH₂PO₄?5g、MgSO₄·7H₂O?0.3g和CaCl₂0.3g溶于水并用水定容至2.5L得到的培養基。

4.一種制備β-葡聚糖酶和/或凝乳酶的方法，是采用權利要求2或3所述培養基發酵權利要求1所述米黑根毛霉，得到β-葡聚糖酶和/或凝乳酶。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法為如下(1)至(5)中的任意一種：

(1)采用權利要求3的(a)所述培養基50℃振蕩發酵權利要求1所述米黑根毛霉，得到β-葡聚糖酶；所述發酵的時間為1天以上，優選為1-6天，最優選為3-5天；

(2)采用權利要求3的(b)所述培養基50℃靜置發酵權利要求1所述米黑根毛霉，得到β-葡聚糖酶；所述發酵的時間為1天以上，優選為1-6天，最優選為3-5天；

(3)采用權利要求3的(c)所述培養基37℃靜置發酵權利要求1所述米黑根毛霉，得到凝乳酶；所述發酵的時間為1天以上，優選為1-6天，最優選為2天；

(4)采用權利要求3的(a)所述培養基37℃振蕩發酵所述米黑根毛霉CAU432，得到凝乳酶；所述發酵的時間為1天以上，優選為1-6天，最優選為3-5天；

(5)在發酵罐中采用權利要求2的(d)所述培養基發酵權利要求1所述米黑根毛霉，得到β-葡聚糖酶；所述發酵的條件為：40-55℃、通氣量為1-2vvm、攪拌速率為300-600rpm、發酵時間為10h以上。