[發明專利]一種pC系列質粒及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201110311432.0
• 申請日: 2011-10-14
• 公開（公告）號: CN102352371A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 柳偉強;楊平;刁文一;楊鵬;張萬方;孫中平;廖國娟
• 申請（專利權）人: 蘇州金唯智生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/65;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 王玉國;陳忠輝

1.?一種pC系列質粒，其特征在于：包括依次首尾相連的rep基因、rop基因、lacZ基因和抗生素抗性基因。

2.根據權利要求1所述的一種pC系列質粒，其特征在于：所述抗生素抗性基因為bla基因、kan基因或者Cmr基因中的任一種，對應的質粒為pCA、pCK或者pCC。

3.根據權利要求2所述的一種pC系列質粒，其特征在于：所述的質粒pCA具有序列表中序列1的核苷酸序列，包括rep基因、rop基因、lacZ基因和bla基因。

4.根據權利要求2所述的一種pC系列質粒，其特征在于：所述的質粒pCK具有序列表中序列2的核苷酸序列，包括rep基因、rop基因、lacZ基因和kan基因。

5.根據權利要求2所述的一種pC系列質粒，其特征在于：所述的質粒pCC具有序列表中序列3的核苷酸序列，包括rep基因、rop基因、lacZ基因和Cmr基因。

6.一種根據權利要求1所述的pC系列質粒的構建方法，其特征在于包括以下步驟：?

步驟一：所述rep基因、rop基因、LacZ基因和抗生素抗性基因通過人工設計并合成；

步驟二：運用PCR的方法將rep基因反向拼接到rop基因的3＇-端，得到rop-rep基因拼接產物；

步驟三：運用PCR的方法將lacZ基因反向拼接到rop-rep基因拼接產物的5＇-端，得到lacZ-rop-rep基因片段；

步驟四：運用PCR的方法將抗生素抗性基因反向拼接到lacZ-rop-rep基因片段的3＇-端，得到線形基因片段；

步驟五：所述線形基因片段通過同源重組的方法環化，最終得到環形的質粒。

7.根據權利要求3所述的一種pC系列質粒的構建方法，其特征在于：所述抗生素抗性基因為bla基因、kan基因或者Cmr基因中的任一種，對應的所述線形基因片段為lacZ-rop-rep-bla、lacZ-rop-rep-kan或者lacZ-rop-rep-Cmr，對應的質粒為pCA、pCK或者pCC。

8.權利要求1所述的一種pC系列質粒的應用，其特征在于：所述pC系列質粒在普通的基因克隆、篩選和測序中的應用。

9.權利要求1所述的一種pC系列質粒的應用，其特征在于：所述pC系列質粒在結構復雜、含有重復序列以及不穩定序列基因的克隆、篩選和測序中的應用。

10.權利要求1所述的一種pC系列質粒的應用，其特征在于：所述pC系列質粒在長片段基因的克隆、篩選、測序和基因組的合成中的應用。