[發明專利]一種彎曲芽孢桿菌及其應用

無效

• 申請號: 201110311380.7
• 申請日: 2011-10-14
• 公開（公告）號: CN102409011A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 陳堅;堵國成;劉龍;李江華;楊海泉
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/28;C12R1/07
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

技術領域

本發明涉及一種彎曲芽孢桿菌及其應用，特別是一種產堿性淀粉酶的彎曲芽孢桿菌及其應用。??

背景技術

α-淀粉酶（EC?3.2.1.1）是一種降解淀粉的重要的工業用酶，主要應用在食品、紡織、醫藥、洗滌劑等領域。堿性淀粉酶最適反應pH應高于8.0，堿性淀粉酶可用于紡織品退漿、洗滌劑添加劑以及以淀粉作粘結劑的粘度調節劑等。Horikoshi（Horikoshi?K.?Production?of?alkaline?enzymes?by?alkalophilic?microorganisms.?Agricultural?and?Biological?Chemistry,1971,?35(11):?1783-1791）在1971年首先報道了產自嗜堿菌A-40-2的堿性淀粉酶。2007年Saxena（Saxena?R,?Voight?BF,?Lyssenko?V,?Burtt?NP,?de?Bakker?PIW,?Chen?H,?Roix?JJ,?Kathiresan?S,?Hirschhorn?JN,?Daly?MJ.?Genome-wide?association?analysis?identifies?loci?for?type?2?diabetes?and?triglyceride?levels.?Science,?2007,?316(5829):?1331-1336）等人篩選到一株可以產堿性淀粉酶的菌株。2010年Pancha（Pancha?I,?Jain?D,?Shrivastav?A,?Mishra?S,?Shethia?B,?Mishra?S,?VP?M,?Jha?B.?A?thermoactive?[alpha]-amylase?from?a?Bacillus?sp.?isolated?from?CSMCRI?salt?farm.?International?Journal?of?Biological?Macromolecules,2010,?47(2):?288-291）等人篩選出一株產耐溫淀粉酶菌株。四川大學盧濤等人(盧濤等.?高溫α-淀粉酶生產菌株的選育[J].?四川大學學報(自然科學版),2002,?39(6):?1131-?1133)從西藏當雄八宿溫泉土壤中篩選出一株分泌高溫淀粉酶的高產突變菌株，為地衣芽孢桿菌，該菌生長的地理環境獨特，其高溫特性良好，經改造得到了一種pH活性域較寬、熱穩定性較高的淀粉酶。目前，國內的前處理酶制劑市場基本被丹麥諾維信公司和美國杰能科公司所壟斷。諾維信公司介紹了一種堿性淀粉酶，有較寬的pH及溫度范圍。目前國內外工業化的堿性淀粉酶幾乎沒有，因此篩選產堿性淀粉酶的優良菌株非常有必要。?

發明內容

本發明提供了一種彎曲芽孢桿菌?(Bacillus?flexus)?JN46，已于2011年7月1日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?M?2011231；以其16SrDNA全序列為基礎的系統發育樹如說明書附圖1所示。?

本發明提供了一種堿性淀粉酶，該酶為CCTCC?NO：M?2011231生產，最適反應pH8.0-10.5，尤其是9.7。?

所述產堿性淀粉酶的彎曲芽孢桿菌是從堿性土壤中篩選，其保藏條件如下：從生長良好的平板上接取3環彎曲芽孢桿菌到搖瓶培養基中，30℃搖床（200?rpm）培養36?h，取0.65?mL移入含有0.3?mL無菌甘油的甘油管中,放入-70℃超低溫冰箱保存。?

所述固態平板培養基為：1.0%?玉米淀粉，0.5%?酵母粉，1.5%?蛋白胨，0.5%?NaCl，0.05%?KH₂PO₄，2%?瓊脂粉，滅菌后，用Na₂CO₃?調pH?9.5-10.5。?

所述液體發酵培養基為：1.5%?可溶性淀粉，1.0%?酵母粉，1.0%?蛋白胨，0.5%?NaCl，0.05%?KH₂PO₄，滅菌后，用Na₂CO₃?調pH?9.5-10.5。?

所述彎曲芽孢桿菌的培養條件為：將已保藏甘油管的彎曲芽孢桿菌接入液體發酵培養基，30℃，200?rpm，搖床培養36?h。?