[發(fā)明專利]人參皂苷Rd誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向分化成肝細(xì)胞

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110310481.2
• 申請日: 2011-10-14
• 公開（公告）號: CN103045531A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田杰
• 申請（專利權(quán)）人: 北京清美聯(lián)創(chuàng)干細(xì)胞科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及人參皂苷Rd在誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化為肝系細(xì)胞中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

根據(jù)皂苷元的不同，人參皂苷被分為原人參二醇類皂苷、原人參三醇類皂苷及齊墩果酸類皂苷。原人參二醇類皂苷含Ra1～3、Rb1～3、Rc、Rd、Rg3、Rh2、Rs1～2、丙二酰人參皂苷Rb1～2、丙二酰人參皂苷Rc、丙二酰人參皂苷Rd、西洋參皂苷R1～2、F2等；原人參三醇類皂苷含Re、Rf、Rg1～2、Rh1、20-葡萄糖基-Rf、三七皂苷R1、三七皂苷R4等；齊墩果酸類皂苷含Ro等。

體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，預(yù)先加入人參總皂苷(ginseng?total?saponins，GTS)或Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2中的任何一個(gè)，可抑制經(jīng)卡巴膽堿(carbachol，一種毒蕈堿受體促效劑)刺激的皮層神經(jīng)元中的肌醇磷酸酯(inositol?phosphates，InsPs)的形成。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，人參皂苷Rd可選擇性地拮抗卡因酸(kainic?acid，KA)引起的致死性興奮性中毒，增加磷酸化的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular?signal?regulated?protein?kinase，ERK)，減少磷酸化的環(huán)磷腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(cyclic?AMP2?response?element?binding?protein，CREB)。人參總皂苷可呈劑量依賴性地減弱KA誘導(dǎo)的致死性毒性，這或許要?dú)w功于其中所含的Rd成分。Rd可能扮演了KA誘導(dǎo)的ERK磷酸化某個(gè)上游路徑阻斷者的角色，Rd還能引起由KA腦室內(nèi)注射誘導(dǎo)的磷酸化CREB脫磷酸化的逆轉(zhuǎn)。從三七中提取的Rd還能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化，而且呈劑量依賴性。另有學(xué)者運(yùn)用硝基丙酸造模的神經(jīng)變性動(dòng)物模型觀察Rb1、Rb3及Rd的神經(jīng)保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三者的預(yù)先給藥均可以明顯改善動(dòng)物運(yùn)動(dòng)障礙，降低動(dòng)物死亡率及減小紋狀體損害體積。還有研究表明，Rb1由靜脈內(nèi)注入永久性大腦中動(dòng)脈閉塞大鼠后，能減少大腦梗塞體積，改善動(dòng)物的位置導(dǎo)航(place?navigation)殘疾，其作用機(jī)理是抗凋亡和可能存在的促進(jìn)血管再生。此外，人參皂苷Rc能濃度依賴性地、可逆地增強(qiáng)辣椒堿誘導(dǎo)的爪蟾卵[表達(dá)vanilloid受體1(VR1)]內(nèi)向電流。VR1的拮抗劑capsazepine幾乎完全阻斷了由辣椒堿和人參皂苷Rc共同引出的內(nèi)向電流。除Rc之外，Rb1、Rb2、Rd、Rf、Rg1均明顯增強(qiáng)由辣椒堿誘導(dǎo)的內(nèi)向電流，按作用強(qiáng)度排序，依次是Rc＞Rf＞Rg1≈Rd＞Rb2＞Rb1。上述體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，人參皂苷減弱由辣椒堿誘導(dǎo)的疼痛的可能機(jī)理與其調(diào)節(jié)VR1通道的功能有關(guān)。運(yùn)用P物質(zhì)誘導(dǎo)的小鼠疼痛模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不僅人參皂苷Rb2、Rc、Rd、Re腦室內(nèi)注射給藥均能產(chǎn)生抗傷害感受作用，而且Rb1、Rb2、Rd、Rf脊椎鞘內(nèi)注射也均能產(chǎn)生抗傷害感受作用。

另有實(shí)驗(yàn)顯示，人參皂苷Rd對嗎啡誘導(dǎo)的小鼠條件性位置偏愛(conditioned?place?preference，CPP)有拮抗作用。人參皂苷Rd的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

人參皂苷Rd分子式：C₅₄H₉₂O₂₃

分子量：1109.29

人參皂苷Rd分離制備方法：運(yùn)用高速逆流法從三七莖葉中分離人參皂苷Rd。最佳技術(shù)參數(shù)：高速逆流色譜儀的柱體積為320ml，主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm。溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-正丁醇-水(4∶1∶5)，上相為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為1.5mL·min^-1。一次可分離得到人參皂苷Rd?18-25mg。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供人參皂苷Rd的新用途，即在誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為肝系細(xì)胞中的應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

人參皂苷Rd在制備誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化為肝系細(xì)胞誘導(dǎo)劑中的應(yīng)用，如利用人參皂苷Rd誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為肝系細(xì)胞(如肝細(xì)胞，膽管細(xì)胞等)。本發(fā)明推薦以人參總皂苷中的人參皂苷Rd作為誘導(dǎo)成體干細(xì)胞定向分化為肝系細(xì)胞的誘導(dǎo)劑。人參皂苷Rd具有與肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte?growth?factor，HGF)類似的作用。

本發(fā)明所述的干細(xì)胞為成體干細(xì)胞，所述的成體干細(xì)胞包括除造血干細(xì)胞外的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以及多種祖細(xì)胞，優(yōu)選為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。

本發(fā)明所述應(yīng)用為：將人參皂苷Rd與細(xì)胞生長因子FGF-4組合作為誘導(dǎo)劑用于誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為肝系細(xì)胞。