[發(fā)明專利]截短側(cè)耳素產(chǎn)生菌的微量培養(yǎng)方法和其高產(chǎn)菌的高通量篩選方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110310065.2
• 申請日: 2011-10-13
• 公開（公告）號: CN102352317A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁劍平;趙曉彬;陶蕾;郭文柱;王學(xué)紅;郭志廷;尚若峰;郝寶成
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00
• 代理公司: 北京中恒高博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 高松

1.一種截短側(cè)耳素產(chǎn)生菌的微量培養(yǎng)方法，其特征在于：所述微量培養(yǎng)方法的步驟如下：

1）、將截短側(cè)耳素產(chǎn)生菌稀釋成菌懸液，涂布于平板，培養(yǎng)后分離單菌落；

2）、配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基：以下為質(zhì)量百分含量：葡萄糖5.7%、玉米漿4%、大豆油0.4%、MgSO₄0.04%、大豆蛋白胨1%、瓊脂粉1.5%，其余為水；

3）、將步驟2）中的固體發(fā)酵培養(yǎng)基高壓滅菌后在無菌環(huán)境中將其加入酶標(biāo)板，每孔加入量為孔體積的1/3-2/3；?

4）、將步驟1）中形成的截短側(cè)耳素產(chǎn)生菌的單菌落菌絲體接種于步驟3）中制備的酶標(biāo)板中，于25℃培養(yǎng)7-9天，完成截短側(cè)耳素產(chǎn)生菌的微量培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微量培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟3）中所述固體發(fā)酵培養(yǎng)基的每孔加入量為孔體積的1/2。

3.一種截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌的高通量篩選方法，其特征在于：所述高通量篩選方法的步驟如下：

1）?將截短側(cè)耳素產(chǎn)生菌稀釋成菌懸液，涂布于平板，培養(yǎng)后分離單菌落；

2）、配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基：以下為質(zhì)量百分含量：葡萄糖5.7%、玉米漿4%、大豆油0.4%、MgSO₄0.04%、大豆蛋白胨1%、瓊脂粉1.5%，其余為水；

3）、將步驟2）中的固體發(fā)酵培養(yǎng)基高壓滅菌后在無菌環(huán)境中將其加入酶標(biāo)板，每孔加入量為孔體積的1/3-2/3；

4）、將步驟1）中形成的截短側(cè)耳素產(chǎn)生菌的單菌落菌絲體接種于步驟3）中制備的酶標(biāo)板中，于25℃培養(yǎng)7-9天；

5）、在步驟4）的每孔中加入50-100μl甲醇或乙醇提取；

6）、每孔吸取一定量提取液，轉(zhuǎn)板于另一酶標(biāo)板中；

7）、向每孔加入濃硫酸顯色，所述濃硫酸的體積大于等于提取液的體積；

8）、將每孔稀釋相同倍數(shù)，吸取稀釋液轉(zhuǎn)板于另一酶標(biāo)板中，在450nm-460nm波長處進(jìn)行酶標(biāo)儀的紫外吸收測定，分析測定結(jié)果，得到篩選后的截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌的高通量篩選方法，其特征在于：步驟3）中所述固體發(fā)酵培養(yǎng)基的每孔加入量為孔體積的1/2。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌的高通量篩選方法，其特征在于：步驟7）中所述濃硫酸的體積與提取液的體積相同。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌的高通量篩選方法，其特征在于：步驟8）中的稀釋倍數(shù)為10-100倍。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌的高通量篩選方法，其特征在于：步驟8）中在455nm波長處進(jìn)行酶標(biāo)儀的紫外吸收測定。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌的高通量篩選方法，其特征在于：步驟5）中提取時間為5-20分鐘。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的截短側(cè)耳素高產(chǎn)菌的高通量篩選方法，其特征在于：步驟5）中提取時間為10分鐘。