[發(fā)明專利]一種利用花梗誘導(dǎo)石蒜愈傷組織的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110309588.5
• 申請日: 2011-10-13
• 公開（公告）號: CN102405841A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳菁玨;夏宜平;常樂;肖郁綿;吳昀
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用花梗誘導(dǎo)石蒜愈傷組織的方法。

背景技術(shù)

石蒜(Lycoris?radiata)是原產(chǎn)我國的著名球根花卉，兼具觀賞價值與藥用價值。石蒜自然繁殖率低，鱗莖幼年期長達5-6年。而近幾年因?qū)κ馑幱脙r值的發(fā)掘，石蒜資源被大量采集，野生資源保護面臨危機。

1979年Koyama最早報道石蒜的組織培養(yǎng)，我國有關(guān)石蒜屬植物的組培研究也逾20年，國內(nèi)研究主要集中在探索通過石蒜不同外植體，如鱗莖、鱗芽、胚等來誘導(dǎo)不定芽或愈傷組織的途徑獲得小植株。通過鱗莖誘導(dǎo)不定芽途徑所需時間短、變異少，是快速繁殖的良好手段；而愈傷組織生長快速、均勻、數(shù)量大，是進行育種、轉(zhuǎn)化體系建立的有效途徑。但取鱗片為外植體，需以損失石蒜鱗莖為代價，對于種質(zhì)資源漸缺的石蒜而言，此方法風(fēng)險較大。許多學(xué)者對石蒜屬植物的愈傷誘導(dǎo)進行了探索，證明了石蒜鱗莖可誘導(dǎo)出愈傷組織，但未見利用花器官為外植體成功誘導(dǎo)愈傷的報道。

申請公布號為CN102144554A的發(fā)明專利公開了一種采用植物組織培養(yǎng)產(chǎn)生石蒜的方法，包括以下步驟：(1)MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，2，4-D、IAA、NAA、6-BA和IBA作為調(diào)控的生長激素制備培養(yǎng)基；(2)石蒜鱗莖作為外植體，消毒；(3)將鱗莖外植體接種在鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，長出小鱗莖；(4)將小鱗莖轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，使其具備獨立從土壤、基質(zhì)中吸收營養(yǎng)元素的能力；(5)將小鱗莖轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基上培養(yǎng)；(6)把接種瓶瓶口打開進行煉苗；取出小鱗莖，移栽至蛭石、珍珠巖和營養(yǎng)土為混合基質(zhì)的營養(yǎng)杯中；轉(zhuǎn)接到大棚中，成活率達94-96％。該發(fā)明的方法采用的是石蒜鱗莖為外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生石蒜，該方法需以損失石蒜鱗莖為代價，對于種質(zhì)資源漸缺的石蒜而言，此方法風(fēng)險較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種利用花梗誘導(dǎo)石蒜愈傷組織的方法，用石蒜花梗作外植體，誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)產(chǎn)生石蒜愈傷組織，不以消耗鱗莖為代價，能有效保護優(yōu)質(zhì)、珍稀石蒜種質(zhì)資源。

一種利用花梗誘導(dǎo)石蒜愈傷組織的方法，包括：

取經(jīng)滅菌處理的石蒜花梗，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在光照條件下培養(yǎng)28-32d后轉(zhuǎn)入黑暗條件下培養(yǎng)88-92d；

所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為含2.0-2.5mg/L?2，4-D和1.5-2.5mg/L?BA的MS培養(yǎng)基，所述的MS培養(yǎng)基中含蔗糖濃度為30-60g/L，瓊脂濃度為5-8g/L，pH5.6-5.8。

所述的光照培養(yǎng)條件為光照周期為12-14h/d，光照強度為1100-1250μmol·m^-2·s^-1，培養(yǎng)溫度為22-28℃。

所述的黑暗培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度22-28℃。

所述的滅菌處理為將石蒜花梗置于含洗潔精與吐溫80的清水中浸泡10-15min后，清水沖洗2-3h，然后用體積比為70-75％的乙醇消毒8-12min，質(zhì)量體積比為0.1％的升汞溶液浸泡10-12min，無菌水沖洗4-5次。

所述的石蒜花梗取自石蒜幼嫩花序。

本發(fā)明的有益效果是：

1)提出一種利用石蒜花梗誘導(dǎo)愈傷組織的方法，最高愈傷誘導(dǎo)率可達78.13％；

2)該方法所用外植體為石蒜未展開花序的花梗，較石蒜鱗莖作外植體內(nèi)生菌少，大大緩解石蒜組培污染率高的問題，提高愈傷組織誘導(dǎo)成功率；

3)用花梗作外植體，不以消耗鱗莖為代價，能有效保護優(yōu)質(zhì)、珍稀石蒜種質(zhì)資源。

附圖說明

圖1為實施例1光照培養(yǎng)30d后的圖像；

圖2為實施例1黑暗培養(yǎng)30d后的圖像；

圖3為實施例1黑暗培養(yǎng)60d后的圖像；

圖4為實施例1黑暗培養(yǎng)90d后的圖像。

具體實施方式

實施例1

1)培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基，各組分與每升的含量分別為：

①基本培養(yǎng)基：MS(Murashige和Skoog?1962)，加入蔗糖30g，瓊脂8g，調(diào)pH5.7；

②誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+2，4-D(2，4二氯苯氧乙酸)2mg，BA(芐氨基腺嘌呤)2mg。