[發(fā)明專利]靶向人CD147小分子RNA干擾序列及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110309174.2
• 申請日: 2011-10-13
• 公開（公告）號: CN102363780A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發(fā)明（設計）人: 張新國;曾艷龍
• 申請（專利權）人: 蘭州理工大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 董斌

技術領域

本發(fā)明涉及抑制宮頸癌細胞增殖，誘導細胞凋亡及增強細胞對化學藥物敏 感性的小片段RNA類藥物及其用途。

背景技術

RNA干擾具有強大的抑制基因表達的效應和高度的特異性，而引起生物醫(yī) 學界幾乎所有研究領域的廣泛興趣。RNAi技術迅速從實驗室推進到臨床。首先， 人基因組項目的完成使得有可能設計能沉默任何基因的小干涉RNA(siRNA)。 其次，我們認識到許多新的靶標對小分子藥物或生物藥物是難以接近的。因此， 設想出一種在mRNA水平上影響這些靶標的方法就具有極大的吸引力。

RNAi技術在很短的時間內(nèi)迅速從體外細胞、動物試驗發(fā)展到臨床試驗，第 1個臨床試驗是由Acuity?Pharmaceuticals公司于2004年底開發(fā)的靶向VEGF 的siRNA用于治療老年性黃斑變性(AMD)，并且發(fā)展迅速。siRNA作用于癌 癥的首例臨床研究是Calando公司的用于治療實體腫瘤的CALAA01，已于2008 年5月獲FDA批準進入I期臨床。CALAA01是包被在環(huán)糊精-轉鐵蛋白-AD-PEG 納米顆粒中的靶向核糖核苷酸還原酶M2亞基的siRNA，通過降低核糖核苷酸 還原酶M2亞基的表達從而起到抑制腫瘤生長，縮小腫瘤體積的作用[51]。嚙齒 類及靈長類動物的研究顯示，CALAA01具有抗腫瘤活性且安全性良好，I期臨 床試驗中36例實體瘤患者接受為期2I天的靜脈注射循環(huán)治療[52]。2009年3 月，Alnylam公司也開展了用于治療肝癌的RNA干擾藥物ALN-VSP02的I期 臨床試驗[53]。該藥物是包被在脂質(zhì)體中靶向KSP(紡錘體驅(qū)動蛋白)和VEGF (血管內(nèi)皮生長因子)的siRNA，通過阻滯細胞周期和抑制腫瘤血管生成以達 到抑制腫瘤生長增殖。I期臨床試驗中58例肝癌患者接受每兩周一次的靜脈注 射治療。

CDI47屬免疫球蛋白超家族中高度糖基化的單次跨膜糖蛋白，是一種新的 細胞表面黏附分子，介導細胞與細胞和細胞與間質(zhì)的黏附作用。研究證明，純 化或重組的CD147可以在體外誘導成纖維細胞合成MMP-1、MMP-2、MMP-3。 隨后對CD147和腫瘤關系的研究發(fā)現(xiàn)，在骨巨細胞瘤、泌尿系腫瘤、肺癌、乳 腺癌、結直腸癌、口腔鱗狀細胞癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、成釉細胞癌、子宮頸癌、子 宮內(nèi)膜癌、骨髓癌、皮膚基底細胞癌、黑色素瘤、皮膚鱗狀細胞癌等腫瘤細胞 中均發(fā)現(xiàn)CD147表達增高，同時MMP活性增加，且與腫瘤的浸潤和轉移相關。 免疫組織化學顯示，相對于正常組織和癌旁組織，癌組織中CD147mRNA的 表達升高。CD147在原發(fā)性腫瘤和惡性程度較低的腫瘤中高表達，提示其在腫 瘤發(fā)展和早期轉移中的作用。

體內(nèi)研究顯示，多種腫瘤基質(zhì)成纖維細胞的MMP表達與CD147的表達水 平密切相關，提示在腫瘤與基質(zhì)的相互作用中，CD147與MMP的表達發(fā)揮重 要作用。免疫組化結果顯示，CD147主要在侵襲性腫瘤的外周表達，從而推測 CD147可能誘導了腫瘤的侵襲和轉移。對黑色素瘤細胞系和口腔鱗癌細胞系的 體外研究證實，使用CD147抗體能夠顯著抑制腫瘤侵襲和轉移。CD147還通 過旁分泌的方式與內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的MMP相互作用，提示腫瘤細胞產(chǎn)生的CD147 通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的MMP誘導腫瘤血管生成。CD147的作用不僅局限于 腫瘤-成纖維細胞、腫瘤-內(nèi)皮細胞的相互作用中，CD147也可以在腫瘤細胞或 成纖維細胞中誘導MMP分泌。在腫瘤細胞中轉染CD147或用重組的CD147 分子處理腫瘤細胞，發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞本身MMP尤其是MMP-2的表達增加。在成 纖維細胞中轉染重組CD147腺病毒載體，也可以誘導MMP-1和MMP-3高表 達。