[發明專利]刺五加苷分化間充質干細胞成少突膠質前體細胞及試劑盒的研制、用于神經系統疾病的藥物

有效

• 申請號: 201110307969.X
• 申請日: 2011-10-12
• 公開（公告）號: CN102337246A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 沈麗;黃啟明;郝麗敏;王振光
• 申請（專利權）人: 北京弘潤天源生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0797
• 分類號: C12N5/0797;A61K35/14;A61K35/24;A61K35/44;A61P25/00;A61P25/28
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技術領域

本發明涉及一種刺五加苷處理人間充質干細胞得到少突膠質前體細胞(Oligodendrocyte?Progenitor?cells，OPC)及其增殖的分化培養基，及其試劑盒研制的方法，以及包括前述方法獲得的前體細胞的用于治療創傷性脊髓損傷與多發性硬化癥等疾病的藥物組合物。更具體地，本發明涉及一種刺五加苷處理人間充質干細胞得到少突膠質前體細胞及其增殖的分化培養基，使用該培養基選擇性的獲得少突膠質前體細胞的方法，以及包括前述方法獲得的少突膠質前體細胞的用于治療創傷性脊髓損傷與多發性硬化癥等疾病的藥物組合物。?

背景技術

少突膠質細胞是中樞神經系統內的一種大膠質細胞。少突膠質細胞是中樞神經系統內唯一的髓鞘生成細胞，同時還分泌多種神經營養因子維持少突膠質細胞與其他神經細胞之間相互的正常生理作用。主要功能是產生髓鞘包繞神經軸突，維持神經沖動沿軸突跳躍性傳導。髓鞘(myelin)由成熟少突膠質細胞延伸的胞質膜構成。脊髓損傷造成少突膠質細胞死亡，是軸突脫髓鞘改變的直接原因。多發性硬化癥是中樞神經系統慢性炎癥性脫髓鞘病，脫髓鞘過程中少突膠質細胞的廣泛丟失，原發性少突膠質細胞損傷并導致繼發性脫髓鞘。?

目前用于神經系統疾病治療的干細胞包括人間充質干細胞(mesenchymal?stem?cells，MSC)，它們體外向神經細胞分化，國外研究較多使用2-硫基乙醇、二甲亞砜、硫代甘油等作為誘導劑，但這些化學制劑均有一定毒性。其不能應用于人體內，使得到的細胞在制備成藥物組合物時安全性差。?

例如，CN200480019375.7公開的由包括人在內的哺乳動物的海馬、小腦、脊髓等組織中分離培養獲得少突膠質祖細胞，通過睫狀神經細胞營養因子和3，3’，5’-三碘甲腺原氨酸可獲得分化的少突膠質細胞，其倫理學問題可能限制了其的應用。?

CN200710195844.6公開了人骨髓間充質干細胞向少突膠質細胞分化的方法，采用黏附分子F3/Contactin誘導分化，其誘導分化成本可能昂貴，得到少突膠質細胞已終端分化，不具有干細胞潛能性。?

綜上，亟需一種操作簡單、成本低、分化純度高、增殖性質穩定的安全的獲得少突膠質前體細胞的方法。?

發明內容

本發明的目的是克服現有的誘導分化人間充質干細胞成少突膠質細胞的方法操作繁復、成本高，分化得到的少突膠質細胞純度低，并且在分離和擴增過程使用的誘導劑中含有對人體有害的藥物，使誘導分化得到的少突膠質細胞在制備成藥物組合物時安全性差的缺點，提供一種誘導分化人間充質干細胞成少突膠質細胞的分化培養基，使用該培養基的分離和擴增少突膠質細胞的方法操作簡單、成本低、分化純度高、性質穩定。?

利用經臨床驗證的傳統中藥作為誘導分化劑具有價廉、安全的優點，可望成為今后臨床神經細胞移植安全有效的誘導分化劑。已經證實一些中藥如：丹參注射液、天麻、黃芩苷等，具有在體外誘導MSC向神經樣細胞分化的作用，主要為神經元樣細胞。?

本發明提供了一種刺五加苷處理人間充質干細胞得到少突膠質前體細胞及其增殖的分化培養基，所述分化培養基包括液體基礎培養基，其中，以所述液體基礎培養基的體積為基準，所述分化培養基還含有1-500ug/mL的刺五加苷、1-20體積％的胎牛血清、5-300ng/mL人表皮生長因子(EGF)和5-300ng/mL堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)。?

本發明還提供了一種刺五加苷處理人間充質干細胞得到少突膠質前體細胞及其增殖的試劑盒研制的方法，其中，所述的試劑盒包括：?

1)間充質干細胞基礎培養基；?

2)刺五加苷；?

3)細胞因子(人表皮生長因子和堿性成纖維細胞生長因子)；?

4)消化細胞的酶以及；?

5)使用說明書；?

本發明還提供了一種用于治療創傷性脊髓損傷與多發性硬化癥等疾病的?藥物組合物，其中，所述藥物組合物包括本發明所述從人間充質干細胞分化方法獲得的少突膠質前體細胞，以及和藥學上可接受的載體或賦形劑。?