[發明專利]柴胡皂苷α處理神經干細胞為神經元樣細胞及其試劑盒的研制、用于神經系統疾病的組合物

有效

• 申請號: 201110307966.6
• 申請日: 2011-10-12
• 公開（公告）號: CN102363767A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發明（設計）人: 沈麗;黃啟明;郝麗敏;王振光
• 申請（專利權）人: 北京弘潤天源生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0793
• 分類號: C12N5/0793;C12N5/0797;A61K35/30;A61P25/00;A61P25/16
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技術領域

本發明涉及一種柴胡皂苷α處理人神經干細胞得到神經元樣細胞(neuron-like?cells，NLC)及其增殖的分化培養基，及其試劑盒研制的方法，以及包括前述方法獲得的神經元樣細胞的用于治療神經系統疾病的藥物組合物。更具體地，本發明涉及一種柴胡皂苷α分化人神經干細胞得到神經元樣細胞的分化培養基，使用該培養基選擇性的獲得神經元樣細胞的方法，以及包括前述方法獲得的神經元樣細胞的用于治療神經系統疾病的藥物組合物。?

背景技術

干細胞具有的自我復制和多分化潛能的特性，使之成為非常理想的細胞資源。但單純神經干細胞移植存在很多問題困擾臨床治療，多種錯綜復雜的因素影響干細胞移植效果，其中干細胞在體內存活率低下，真正到達病灶位的干細胞分化成終端功能的細胞很少，難以形成有效的治療效果。在干細胞移植前先將干細胞進行誘導成功能性的成神經樣細胞，后移植到體內進行治療，可能達到比單獨干細胞移植更好的療效。?

神經系統有大量神經元。神經元是腦的主要成分，神經元群通過各個神經元的信息交換，實現腦的分析功能，進而實現樣本的交換產出；產出的樣本通過聯結路徑點亮丘覺產生意識。神經元細胞的病變、變性或損傷等必能引起各種神經系統疾病，如腦卒中、腦性癱瘓、腦損傷、腦出血、骨髓側索硬化癥和帕金森病等。?

例如，CN?1923195A公開的由香豆素類化合物誘導神經干細胞定向分化，可分化為少突膠質前體細胞，其表明可作為誘導神經干細胞定向分化的藥物，但并未公開其可以定向分化為神經元樣細胞。?

已有文獻報道了中藥可以誘導間充質干細胞可以分化為神經元樣細胞，例如三七總皂苷、丹參酮、硫代甘油和丹參注射液等。這些報告都表明中藥可以?誘導間充質干細胞轉分化為神經元樣細胞，而分化效率和增殖傳代能力并沒有確定。?

綜上，亟需一種操作簡單、成本低、分化純度高、增殖效率高且傳代細胞性質穩定的安全的獲得神經元樣細胞的方法。?

發明內容

本發明的目的通過中藥高效地分化神經干細胞成神經元樣細胞，并增殖不分化，克服現有的獲得和增殖神經元樣細胞的方法操作繁復、成本高，分化得到的神經元樣細胞純度低、增殖效率低、容易分化變性，并且在分化和增殖過程使用的培養基中含有很多對人體有害的藥物，使分化和增殖得到的神經元樣細胞在制備成藥物組合物時安全性差的缺點，提供一種神經元樣細胞的分化培養基，使用該培養基的分化和增殖得到的神經元樣細胞的方法操作簡單、成本低、分化純度高、增殖效率高且傳代細胞性質穩定。?

本發明提供了一種神經干細胞分化為神經元樣細胞及其增殖的分化培養基，所述分化培養基包括液體基礎培養基，其中，以所述液體基礎培養基的體積為基準，所述分化培養基還含有1-500ug/mL的柴胡皂苷α、1-20體積％的胎牛血清、5-200ng/mL的人表皮生長因子和5-200ng/mL的堿性成纖維細胞生長因子。?

本發明還提供了一種柴胡皂苷α分化神經干細胞成神經元樣細胞及其增殖的方法，其中，所述方法使用本發明所述的分化培養基培養所述神經干細胞。?

本發明還提供了一種柴胡皂苷α分化神經干細胞成神經元樣細胞及其增殖的試劑盒研制的方法，其中，所述的試劑盒包括：?

1)基礎培養基；?

2)柴胡皂苷α；?

3)細胞因子(人表皮生長因子和堿性成纖維細胞生長因子)；?

4)消化細胞的酶以及；?

5)使用說明書；?

本發明還提供了一種用于治療神經系統疾病的藥物組合物，其中，所述藥物組合物包括本發明所述從神經干細胞分化成神經元樣細胞及其增殖的方法獲得的神經元樣細胞，以及和藥學上可接受的載體或賦形劑。?

使用本發明的選擇培養基的本發明的從神經干細胞分化成神經元樣細胞及其增殖的方法，能夠高效分化和大量增殖神經元樣細胞，并經傳代增殖的神經元樣細胞仍然保持與原有的性狀。由于本發明的選擇培養基選擇性強，傳代培養得到的神經元樣細胞純度可達到85％以上。因此，本發明的方法無需使用磁珠等高成本安全性差的藥物就能達到更高純度的分離效果，避免了繁復的操作，因而降低了成本，并且由該方法得到的神經元樣細胞的安全性大大提高，可以制備成本發明用于治療神經系統疾病的藥物組合物。本發明用于治療神經系統疾病的藥物組合物不僅安全性好，而且能在體內修復神經系統疾病中損傷的神經元細胞，從而為治療神經系統疾病提供了可能。?

附圖說明