[發明專利]公豬去異味重組噬菌體疫苗

有效

• 申請號: 201110305962.4
• 申請日: 2011-10-11
• 公開（公告）號: CN102335422A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 徐海;王義偉;侯繼波
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;C12N7/01;C12N15/70;A61P43/00;C12R1/19;C12R1/92
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 王荷英

技術領域

本發明涉及一種用免疫學方法去除公豬內源性異味物質、改善肉質的公豬去異味重組噬菌體疫苗，屬于分子生物技術領域。

背景技術

GnRH由丘腦下部的GnRH神經元合成，以顆粒或囊泡的形式貯存于細胞內，已從脊椎動物和原索動物的神經組織中分離出13種不同的GnRH，所有哺乳動物包括人類的GnRH結構是一樣的，其氨基酸序列為：PYROGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，即焦谷氨酸-組氨酸-色氨酸-絲氨酸-酪氨酸-甘氨酸-亮氨酸-精氨酸-脯氨酸-甘酰肽。GnRH疫苗主動免疫動物后，可誘導動物機體產生特異性的抗GnRH的抗體，該抗體與動物自身分泌的內源性的GnRH結合并使其失去生物活性，從而導致下丘腦-垂體-性腺軸功能的破壞，抑制LH和FSH的釋放，進而導致性腺內分泌變化。對雄性動物，導致類固醇激素分泌減少，睪丸及性腺萎縮，精子生成受阻；對雌性動物，則導致乏情期延長或不發情，卵泡發育、排卵及黃體形成受阻，卵巢、子宮萎縮。最終使動物大部分甚至完全喪失生殖能力。

在大多數家畜中，沒經過去勢的雄性動物要比經過去勢的生長更快、效率更高，并且酮體品質更為優良。Wood等人發現未經去勢處理的公豬比去勢公豬生長更快，飼料報酬更高。Kuhlers等人報道，未經去勢的公豬與同等體重經過去勢的相比，眼肌面積明顯增大。Robertson?等用GnRH?免疫公牛，發現免疫牛睪丸萎縮，性欲降低“去勢”效果持續了6個月，并且其脂肪減少了32?%，第10肋骨處眼肌面積增加了50?%?，而同時料重比降低了12?%。

理論上生產未去勢的公豬能帶來明顯的經濟效益，但在實際生產過程中仍有許多不利因素需要克服。未去勢公豬在性成熟后具有明顯的攻擊性，對圈養設施要求增高，需要分性別單獨飼養，對飼養員的危險也明顯增高。性成熟公豬爬跨頻繁，豬群撕咬打斗增多，不但提高了受傷的幾率還降低飼料報酬，給生產過程帶來極大的不便。生產未去勢公豬的另一個問題是這種豬肉在烹飪過程中發出令人不愉悅的味道，俗稱“豬臊味”。有研究表明，出售未經去勢的公豬肉有5%-35%的酮體具有另消費者不適的異味。公豬的異味在發情期首次出現，在公豬達到70kg體重或4個月年齡時逐漸升高，脂肪中異味物質含量較高的大多是體重大于95kg或生長期大于5個月的未去勢公豬，但在去勢后會逐步消失，其性行為也在去勢后逐步消失轉而變得溫順。我國生豬養殖過程多采用手術去勢的方法來處理豬肉中的異味，這種方法簡便徹底但也帶來很多負面作用。豬的睪丸是高度管狀且充滿神經的，只能對未發育的幼年豬進行手術去勢，對于性成熟的大豬則不適用。同時手術去勢不僅降低豬的生產率和豬肉品質，還具有諸多風險：傷口出血、感染，嚴重的疝氣，使動物發育不良或死亡。

近年來已經有多種方法被用來試圖克服手術去勢所帶來的弊端，例如，體內植入激素法、化學去勢法。激素處理需要反復多的注射，化學法去勢能絕育但影響豬的生長性能。因此，需要一種既能抑制豬肉中的異味物質又不影響豬的生長性能的方法。本發明涉及的免疫去勢法能夠很好的兼顧這二者的需要。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足之處，提供一種公豬去異味重組噬菌體疫苗。

本發明的公豬去異味重組噬菌體疫苗，以重組噬T7菌體為抗原，所說的重組T7噬菌體表面表達有氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示的GnRH蛋白，所說的GnRH蛋白由三份拷貝的GnRH基因插入T7噬菌體P10B基因下游表達獲得。

所述的三份拷貝的GnRH基因選自以下序列的核苷酸：

1)具有SEQ?ID?NO：1所示核苷酸序列；

2)具有SEQ?ID?NO：1所示序列經增加或減少拷貝數的核苷酸序列；

3)具有SEQ?ID?NO：1所示序列經改變、缺失或增加一個或幾個核苷酸但仍表達具有GnRH主要抗原活性多肽的核苷酸序列。

所說的疫苗中還包含用于乳化重組T7噬菌體的白油佐劑。

本發明的公豬去異味重組噬菌體疫苗的構建方法，包括下列步驟：

A、構建重組噬菌體

(1)合成一段DNA序列，該DNA序列克隆至pUC-19載體多克隆位點中，DNA序列的5’端有酶切位點EcoRⅠ，3’端含有酶切位點HindⅢ，其DNA序列如SEQ?ID?NO：3所示；

(2)用限制性內切酶EcoRⅠ、HindⅢ將上述DNA序列從pUC-19載體上切下后插入T7噬菌體多克隆位點的EcoRⅠ和HindⅢ之間，構建重組噬菌體；