[發(fā)明專利]一種云杉苷的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110304593.7
• 申請(qǐng)日: 2011-10-10
• 公開（公告）號(hào): CN102321130A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉東鋒;吳艷波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C07H15/203
• 分類號(hào): C07H15/203;C07H1/08
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種云杉苷的制備方法。

背景技術(shù)

云杉苷，英文名：Picein；分子式：C₁₄H₁₈O₇；分子量：298.29；化學(xué)性質(zhì)：水中析出者為針狀結(jié)晶的一水合物。甲醇中析出者為無(wú)水物。味苦。15℃時(shí)1g產(chǎn)品溶于50ml冷水、1ml沸水、約650ml冷無(wú)水乙醇、約40ml沸無(wú)水乙醇和140ml乙酸乙酯，溶于熱的冰乙酸，幾乎不溶于乙醚和氯仿。在稀礦酸及氫氧化堿中均被水解成D-葡萄糖及對(duì)羥基苯乙酮。熔點(diǎn)195～196℃（無(wú)水品）。

兔兒風(fēng)屬植物為多年生草本，民間藥用全草，資源豐富，并有悠久的民間藥用歷史。具有清熱、利濕、涼血、解毒的功效，廣泛用于治療感冒咳喘、風(fēng)濕疼痛、跌打損傷、活血止血、腸炎痢疾、咽喉炎及泌尿系統(tǒng)疾病等癥。《上海市藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《江西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》均有收載。兔兒風(fēng)是我國(guó)特有的植物，但目前尚無(wú)對(duì)其化學(xué)成分的系統(tǒng)研究。因此，從基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究的角度來(lái)看，都有必要對(duì)兔兒風(fēng)的有效成分進(jìn)行深入研究，為中藥質(zhì)量控制和中藥藥理研究提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)該植物中存在結(jié)構(gòu)新穎獨(dú)特和有活性的先導(dǎo)化合物，具有抗腫瘤和抗炎活性。其中，云杉苷具有對(duì)CCl₄和GalN引起的大鼠肝細(xì)胞中毒有弱的抗肝毒活性。

目前云杉苷的制備方法較少，文獻(xiàn)“中甸兔兒風(fēng)的活性成分研究”，該文獻(xiàn)公開的方法是醇提，正丁醇萃取，反覆硅膠柱層析得到云杉苷，該法正丁醇萃取率較低，保留成分損失較大。尚未有報(bào)道用半制備色譜對(duì)云杉苷進(jìn)行分離純化的報(bào)道。本發(fā)明采用常規(guī)大孔樹脂柱分離和高效液相色譜相結(jié)合的方法制備云杉苷。該方法操作簡(jiǎn)單，產(chǎn)品純度高，可達(dá)98%以上。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明采用常規(guī)大孔樹脂柱分離和高效液相色譜相結(jié)合的方法制備云杉苷。該方法操作簡(jiǎn)單，產(chǎn)品純度高，可達(dá)98%以上。

本發(fā)明的目的是提供一種云杉苷的制備方法，具體步驟如下：

（1）提取：將兔兒風(fēng)屬藥材粉碎，經(jīng)乙醇水提取后，趁熱過(guò)濾、合并提取液，減壓濃縮得濃縮液；

（2）萃取：將濃縮液用石油醚萃取，棄去萃取液；

（3）柱層析：將水層上大孔樹脂柱吸附，丙酮-甲醇-水洗脫，分步收集，每份約500ml，合并云杉苷流分，低溫濃縮至干；

（4）純化：將干燥物用流動(dòng)相溶解，采用半制備型液相色譜純化，收集保留流分，減壓濃縮、干燥，最后采用冰乙酸熱回流結(jié)晶得產(chǎn)品。

步驟（1）中所述乙醇濃度體積百分比為45-65%，提取兩次，液料比為3-10:1（V/W）。

步驟（3）中所述大孔樹脂為HPD300、HPD450、NKA-9、AB-8型大孔樹脂，所述洗脫條件為先用水洗至顏色變淺，然后改用丙酮-甲醇-水（15:25:10）洗脫。

步驟（4）中所述半制備型高效液相色譜條件為：ODS?C18柱；流動(dòng)相組成體積比：甲醇-水（38-65:35-62），流速5.0-20ml/min，柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：UV307nm。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：1）操作耗時(shí)短，易于產(chǎn)業(yè)化放大；2）提取、柱層析、制備液相分離等步驟中的溶劑用量少，并可回收再利用；3）具有較高的經(jīng)濟(jì)效益和學(xué)術(shù)價(jià)值，本發(fā)明所得產(chǎn)品純度高，可為云杉苷的進(jìn)一步開發(fā)提供藥理原料和實(shí)踐支持。

下面將結(jié)合具體實(shí)施方式進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

取3kg兔兒風(fēng)屬藥材經(jīng)粉碎后按照料液比3:1（V/W）用體積百分比濃度為65%的乙醇回流提取兩次，提取液減壓濃縮，用石油醚萃取，棄去萃取液，水層上HPD300型大孔樹脂柱吸附，先用水洗至顏色變淺，再改用丙酮-甲醇-水（15:25:10）洗脫，分步收集，每份約500ml，合并云杉苷流分，5℃低溫濃縮至干，將干燥物溶于流動(dòng)相中，超聲溶解，用半制備型高效液相色譜儀進(jìn)行精制，色譜條件為：色譜柱，ODS?C18柱；流動(dòng)相組成體積比，甲醇-水（38:62），流速5.0ml/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)，UV307nm，進(jìn)樣量：50μl，柱溫：室溫，按照色譜峰進(jìn)行切割收集合并，減壓濃縮、干燥，最后采用冰乙酸熱回流結(jié)晶得云杉苷無(wú)色結(jié)晶0.12g，含量98.6%。

實(shí)施例2：