[發(fā)明專利]獲得大豆轉(zhuǎn)基因愈傷組織的方法及其培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110304260.4
• 申請(qǐng)日: 2011-10-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103031269A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓天富;曹東;侯文勝;吳存祥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): C12N5/04
• 分類號(hào): C12N5/04;C12N15/82
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及獲得大豆轉(zhuǎn)基因愈傷組織的方法及其培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

大豆遺傳轉(zhuǎn)化方法有許多，其中以根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍介導(dǎo)法為主。但是，不管是根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法還是基因槍介導(dǎo)法，其遺傳轉(zhuǎn)化效率依舊低下，且轉(zhuǎn)化周期長(zhǎng)。另一方面，隨著大豆EST序列等相關(guān)數(shù)據(jù)的不斷豐富以及基因組測(cè)序的完成，從大豆中克隆基因會(huì)變得更加容易，而對(duì)于基因功能驗(yàn)證的需求會(huì)更加迫切。低效、費(fèi)時(shí)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)難以滿足大豆基因功能驗(yàn)證日益增長(zhǎng)的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種獲得大豆轉(zhuǎn)基因愈傷組織的方法。

本發(fā)明所提供的獲得大豆轉(zhuǎn)基因愈傷組織的方法，包括以下步驟：

以大豆轉(zhuǎn)基因發(fā)狀根為外植體I，用下述誘導(dǎo)大豆愈傷組織的培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)所述外植體I，即得到大豆轉(zhuǎn)基因愈傷組織。

所述方法還包括用下述成套培養(yǎng)基中的繼代培養(yǎng)基培養(yǎng)大豆轉(zhuǎn)基因愈傷組織的步驟。

所述大豆轉(zhuǎn)基因發(fā)狀根是通過(guò)包括如下步驟的方法制備得到：

(1)以大豆子葉節(jié)為外植體II，用含有外源目的DNA的發(fā)根農(nóng)桿菌浸染所述外植體II，得到經(jīng)過(guò)所述發(fā)根農(nóng)桿菌浸染后的外植體II；

(2)將上述步驟(1)得到的經(jīng)過(guò)所述發(fā)根農(nóng)桿菌浸染后的外植體II用共培養(yǎng)基進(jìn)行共培養(yǎng)，得到共培養(yǎng)后的外植體II；

(3)將上述步驟(2)得到的所述共培養(yǎng)后的外植體II用根誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，即得到大豆轉(zhuǎn)基因發(fā)狀根。

所述步驟(2)中所述共培養(yǎng)基由以下成分組成：

NH₄NO₃、KNO₃、KH₂PO₄、CaCl₂·2H₂O、MgSO₄·7H₂O、KI、Na₂MoO₄·2H₂O、H₃BO₃、CuSO₄·5H₂O、MnSO₄·H₂O、CoCl₂·6H₂O、ZnSO₄·7H₂O、Na₂EDTA·2H₂O、FeSO₄·7H₂O、煙酸、肌醇、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、甘氨酸、乙酰丁香酮、赤霉素、L-半胱氨酸、二硫蘇糖醇、蔗糖、瓊脂和水；

以上成分在所述共培養(yǎng)基中濃度分別為：

NH₄NO₃0.825g/L、KNO₃0.95g/L、KH₂PO₄0.085g/L、CaCl₂·2H₂O?0.22g/L、MgSO₄·7H₂O?0.185g/L、KI?0.83mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O?0.25mg/L、H₃BO₃6.2mg/L、CuSO₄·5H₂O?0.025mg/L、MnSO₄·H₂O?16.9mg/L、CoCl₂·6H₂O?0.025mg/L、ZnSO₄·7H₂O?8.6mg/L、Na₂EDTA·2H₂O?27.8mg/L、FeSO₄·7H₂O?37.3mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇100mg/L、鹽酸硫胺素0.1mg/L、鹽酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、乙酰丁香酮40mg/L、赤霉素0.25mg/L、L-半胱氨酸400mg/L、二硫蘇糖醇154mg/L、蔗糖30mg/L和瓊脂7g/L；

所述共培養(yǎng)基的pH值為5.4；

所述步驟(3)中所述根誘導(dǎo)培養(yǎng)基由包括以下成分的物質(zhì)組成：