[發明專利]一種用于合成丙烯酰胺含有光敏性腈水合酶菌株的催化劑及其應用

無效

• 申請號: 201110304076.X
• 申請日: 2011-10-10
• 公開（公告）號: CN102329757A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 孫安順
• 申請（專利權）人: 孫安順
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P13/02;C12R1/40
• 代理公司: 大慶禹奧專利事務所 23208
• 代理人: 朱士文;楊曉梅

1.一種用于合成丙烯酰胺含有光敏性腈水合酶菌株的催化劑，

菌體發酵培養：將惡臭假單胞菌(Pseudomonas?putida)菌體接種于固體培養基，活化后挑取菌苔在搖床中發酵制備腈水合酶，搖床轉速100～200r·min^-1，溫度為25～40℃，每6小時用4mol·L^-1的NaOH溶液調節pH值，使之維持在6.5～7.5之間，培養50～100h后得到具有腈水合酶活力的發酵液，且發酵液的總酶活達800～1200萬單位/毫升發酵液；

催化劑懸浮液：將發酵液在分離因素≥4000離心分離，去上清液，將細胞懸浮于去離子水或20mM、pH為7.0～8.0的磷酸鉀緩沖溶液中，配成細胞濃度為5％(wt)的催化劑懸浮液；

上述方案中所用的固體培養基配方為：甘油0.2～2％、酵母浸膏0.5～1.5％、瓊脂0.2～2％、尿素0.1～1％、K₂HPO₄0.1～0.5％、KH₂PO₄0.1～0.5％、NaCl0.1～1％及MgSO₄0.005～0.02％，脫鹽水10～15％，余量為淀粉；發酵培養基配方為：甘油0.2～2％，酵母浸膏0.5～1.5％，谷氨酸0.2～2％，尿素0.2～2％，K₂HPO₄0.1～0.5％，KH₂PO₄0.1～0.5％，MgSO₄0.005～0.02％，Fe³⁺0.001～0.01％，pH值6.5～7.5，余量為脫鹽水；上述百分比為質量百分比。

2.權利要求1所述的用于合成丙烯酰胺含有光敏性腈水合酶菌株的催化劑，其特征在于：菌體發酵培養：將菌體接種于固體培養基，活化后挑取菌苔在搖床中發酵制備腈水合酶，搖床轉速100r·min^-1，溫度為35℃，每6小時用4mol·L^-1的NaOH溶液調節pH值，使之維持在7.5，培養72h后得到具有腈水合酶活力的發酵液；且發酵液的總酶活達800～1200萬單位/毫升發酵液；

將上述發酵液在分離因素為5000，離心分離，去上清液，將細胞懸浮于20mM、pH為7.5的磷酸鉀緩沖溶液中，配成細胞濃度為5％(wt)的催化劑懸浮液；

固體培養基：甘油0.5％，酵母浸膏1％，瓊脂1％、尿素0.3％、K₂HPO₄0.3％、KH₂PO₄0.3％、NaCl?0.5％、MgSO₄0.01％、脫鹽水10～15％，余量為淀粉；

發酵培養基：甘油1.5％、酵母浸膏1％、谷氨酸1％、尿素1.2％、K₂HPO₄0.3％、KH₂PO₄0.3％、MgSO₄0.01％、Fe³⁺0.003％，pH值7，余量為脫鹽水。

3.權利要求3所述的用于合成丙烯酰胺含有光敏性腈水合酶菌株的催化劑的應用，包括如下步驟：向催化劑懸浮液中緩慢加入丙烯腈，在光照、常壓，溫度為25℃，200r·min^-1的攪拌速度下進行酶催化水合反應，丙烯腈的添加量占反應體系的20％(wt)，經過10h的反應，獲得丙烯酰胺溶液；催化劑懸浮液與丙烯腈反應液質量比為1∶100～1∶200之間。