[發明專利]信號調節蛋白α在制備預防和治療過敏反應性疾病藥物中的應用

無效

• 申請號: 201110303805.X
• 申請日: 2011-10-10
• 公開（公告）號: CN102430128A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 王紅陽;董立巍;王敏;談冶雄;潘宇飛
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;C12N15/867;C12N15/861;A61P37/08
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 丁振英

技術領域

本發明屬于醫學生物工程技術領域。具體的說，本發明涉及一種信號調節蛋白α(SIRPα)在制備預防和治療過敏反應性疾病藥物中的應用。

背景技術

信號調節蛋白α(signal-regulatory?proteins，SIRPα)是一個抑制性受體蛋白家族成員。在1996年的MOLECULAR?AND?CELL?BIOLOGY雜志和1997年發表的NATURE雜志中，大鼠的蛋白酪氨酸磷酸酶SIRP?α首先被鑒定。SIRPα也叫SHPS-1，CD172，P84，是一種主要表達與髓系細胞的膜蛋白，GeneID：19261.SIRPα結構由一個包含3個免疫球蛋白樣結構的膜外段、包含一個ITIM基序的胞內段及包含24個氨基酸的跨膜區組成。由于其特殊的細胞定位和結構，決定了它在不同細胞中傳遞不同信號發揮不同的調節功能。

SIRPα是目前發現的為數不多的同時表達于免疫細胞與組織細胞的抑制性受體；而在免疫細胞它只表達在樹突狀細胞(DC)、單核/巨噬細胞和肥大細胞，而不在淋巴細胞表達。在免疫調節方面的作用，有報道在樹突狀細胞(DC)，SIRPα可抑制LPS誘導的DC成熟并抑制成熟DC分泌IL-12，且DC表面SIRPα還可通過與其在T細胞上的配體CD47的作用雙向負調節T細胞和DC的功能(參見本申請人于20100316申請的中國發明專利申請CN201010125677.X，發明名稱為：信號調節蛋白α在制備預防和治療腫瘤的DC疫苗中的應用)。

目前尚無文獻報道SIRPα在制備預防和治療過敏反應性疾病藥物中的應用。也無文獻報道有關SIRPα調節肥大細胞激活。

發明內容

本發明的目的在于提供信號調節蛋白α的新用途，特別是提供SIRPα在制備預防和治療過敏反應性疾病藥物中的應用。

在本發明中我們克隆了SIRPα基因，構建了質粒；同時我們分析和構建了干擾SIRPα表達的siRNA和干擾質粒；本發明還利用上述兩種質粒構建了慢病毒，可以過表達或干擾SIRPα表達。利用構建的質粒和siRNA，我們可以調控SIRPα表達水平。利用制備的生物材料我們可以通過干預肥大細胞SIRPα水平來預防和治療過敏性疾病。

本發明的技術方案主要包括一下幾個方面：

1、siRNA干擾片段的設計和成；干擾SIRPα質粒的構建。

2、SIRPα基因的克隆和表達質粒的構建。

3、腺病毒表達載體、干擾載體的構建和病毒的包裝。

4、骨髓來源的肥大細胞的分離培養和腺病毒感染。

5、體外觀察過表達和干擾SIRP?α表達肥大細胞的反應：(a)過敏反應模型下觀察肥大細胞脫顆粒情況；(b)過敏原刺激下肥大細胞炎性因子合成分泌情況和(c)激活信號通路情況；(d)肥大細胞激活狀態下細胞骨架聚合情況和(e)細胞內鈣離子流動情況。

本發明提供了信號調節蛋白α在制備預防和治療過敏反應性疾病藥物中的應用。

本發明提供的調節SIRPα表達的工具能夠顯著地影響肥大細胞活化狀態，實驗結果表明：

1)高低不同SIRPα表達對肥大細胞脫顆粒反應調節作用。

RBL細胞高表達SIRPα減少細胞鈣離子流動，抑制脫顆粒反應，而肥大細胞內干擾SIRPα表達更容易激活肥大細胞脫顆粒反應。(圖3g)

2)高低不同SIRPα表達肥大細胞細胞因子表達分析。高表達SIRPα均能抑制肥大細胞IL4、IL13和TNFαmRNA水平。(圖3c，d.e)

3)RBL2H3及骨髓來源的肥大細胞檢測結果證明，SIRPα表達能夠抑制IgE誘導的p-p38、p-JNK、p-ERK水平(圖4a，b)。

4)應用RBL2H3細胞系檢測證實SIRPα抑制AKT激活水平(圖4c，d)。