[發明專利]青蝦AST基因和用于擴增青蝦AST基因的引物組、及其擴增方法無效
| 申請號： | 201110303793.0 | 申請日： | 2012-02-06 |
| 公開（公告）號： | CN102433344A | 公開（公告）日： | 2012-05-02 |
| 發明（設計）人： | 傅洪拓;卜憲飛;喬慧;吳滟;龔永生 | 申請（專利權）人： | 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心 |
| 主分類號： | C12N15/16 | 分類號： | C12N15/16;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 南京經緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 李紀昌 |
| 地址： | 214081*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 青蝦 ast 基因 用于 擴增 引物 及其 方法 | ||
1.青蝦AST基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。
2.用于擴增青蝦AST基因的引物組，其特征在于，其由如下引物組成：
引物組1：
正向引物ASF1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；
正向引物ASF2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示；
正向引物ASF3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示；
正向引物ASF4的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5所示；
反向引物ASR1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:6所示；
反向引物ASR2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:7所示；
反向引物ASR3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:8所示；
反向引物ASR4的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:9所示；
引物組2：
正向外引物3ASF1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:10所示；
正向內引物3ASF2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11所示；
反向外引物5ASR1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:12所示；
反向內引物5ASR2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:13所示。
3.一種擴增青蝦AST基因的方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟1：獲得青蝦腦組織總RNA；
步驟2：合成cDNA；
步驟3：用引物組1擴增獲得青蝦AST基因265～2681bp片段；所述引物組1由如下引物組成：
正向引物ASF1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；
正向引物ASF2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示；
正向引物ASF3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示；
正向引物ASF4的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5所示；
反向引物ASR1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:6所示；
反向引物ASR2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:7所示；
反向引物ASR3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:8所示；
反向引物ASR4的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:9所示；
步驟4：用引物組2擴增獲得青蝦AST基因265～2681bp片段的3’端和5’端片段；所述引物組2由如下引物組成：
正向外引物3ASF1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:10所示；
正向內引物3ASF2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11所示；
反向外引物5ASR1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:12所示；
反向內引物5ASR2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:13所示。
4.步驟5：將所述AST基因cDNA序列的265～2681bp片段、所述AST基因265～2681bp片段的3’端和5’端片段拼接，即得。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟4所述擴增為套式兩輪PCR。
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