[發(fā)明專利]一種桑白皮總黃酮的純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110302498.3
• 申請日: 2011-10-09
• 公開（公告）號: CN103027951A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周英
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州大學
• 主分類號: A61K36/605
• 分類號: A61K36/605;A61P3/10;A61P7/10;A61P25/20;A61P29/02;A61P31/18;A61P35/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務(wù)所 52100
• 代理人: 劉楠;顧書玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥提取物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種桑白皮總黃酮的純化方法。

背景技術(shù)

桑白皮(Cortex?Mori)為桑科植物桑屬植物(?Morus?alba?L1)?的干燥根皮，性甘、寒，歸肺經(jīng)，有瀉肺平喘、利水消腫之功效。桑白皮主要含多種黃酮類成分，包括摩魯新L.、桑根白皮素(Morusin)、環(huán)桑素、桑酮。環(huán)桑烯等。文獻報道其總黃酮具有利尿、降壓、降糖、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗癌及抗HIV等作用。桑白皮通常采用乙醇溶液提取獲得總黃酮粗提物，該粗提物中總黃酮的含量較低，還不能達到使用要求。目前，有用聚酰胺來純化桑白皮總黃酮的報道，但聚酰胺的死吸附嚴重、不易洗脫，總黃酮的損失很大，并且用聚酰胺純化后的總黃酮含量為33.5%，也是遠遠達不到藥品注冊管理辦法規(guī)定的有效部位含量占提取物的50%以上的規(guī)定。

大孔吸附樹脂是一種具有多孔性的高分子分離材料，具有穩(wěn)定性高、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、操作簡便、成本較低、可反復(fù)使用等特點。大孔吸附樹脂主要是通過物理作用從溶液中有選擇性地吸附有機物質(zhì)，從而達到分離純化的目的。大孔樹脂純化技術(shù)是中藥制藥工業(yè)中頗具發(fā)展前景的實用新技術(shù)之一，已被成功地應(yīng)用于黃酮類、皂苷類、生物堿類等藥物的提取分離，在葛根、銀杏黃酮純化中運用比較廣泛。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有桑白皮總黃酮提取物中總黃酮含量低的缺陷，提供一種桑白皮總黃酮的純化方法，純化后，總黃酮的含量可達53.6%。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

????本發(fā)明桑白皮總黃酮的純化方法：取桑白皮總黃酮粗提物，用乙醇溶液溶解為相當于原生藥0.5～1g/l的粗提物溶液，調(diào)整pH為5～6，以1.5～2.5BV/h的上樣流速上大孔樹脂層析柱層析，上樣體積≤2BV，吸附完成后先用8～12BV蒸餾水洗脫，再用50～95%的乙醇溶液以1～1.5BV/h的流速洗脫至無黃酮為止，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得高純度桑白皮總黃酮提取物。

優(yōu)選的，上述桑白皮總黃酮的純化方法為：取桑白皮總黃酮粗提物，用70%乙醇溶液溶解為相當于原生藥0.7g/l的粗提物溶液，調(diào)整pH為5～6，以2BV/h的上樣流速上大孔樹脂層析柱層析，上樣體積≤2BV，吸附完成后先用10BV蒸餾水洗脫，然后用70%的乙醇溶液以1BV/h的流速洗脫至無黃酮為止，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得高純度桑白皮總黃酮提取物。

優(yōu)選的，前述純化方法中所用的大孔樹脂為弱極性大孔樹脂，優(yōu)選AB-8型大孔樹脂。

上述技術(shù)方案是通過如下的實驗篩選出來的：

1、材料與儀器

1.1材料

藥材：桑白皮(Cortex?Mori)，購于貴州圣濟堂公司，經(jīng)貴州大學廖海民教授鑒定為桑科植物桑屬植物(?Morus?alba?L1)?的干燥根皮。標準品：摩魯新L（自制），經(jīng)HPLC的C譜、H譜、紅外、紫外鑒定為單一化合物，純度為98%以上。?大孔樹脂：AB-8、D101、S-8。

1.2?主要儀器與設(shè)備

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A：上海亞榮生化儀器廠；SHB-95型循環(huán)水式多用真空泵：鞏義市英峪予華儀器廠；DJ-200A電子天枰：?莆田市秀嶼區(qū)亞太電子天平廠；SP--2100型可見分光光度計：上海光譜儀器有限公司．

2、方法

2.1?摩魯新L標準工作曲線及回歸方程

準確稱取經(jīng)105℃干燥至恒量的摩魯新L.28.7mg，無水乙醇60℃水浴加熱溶解,?室溫冷卻后轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中,無水乙醇定容,?搖勻，得0.574mg/ml的對照品溶液，備用。

精密吸取上述的摩魯新L對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分別置于10.0?ml容量瓶中，再分別向其中加入3%（重量）AlCl₃水溶液0.5ml進行顯色，無水乙醇定容，同時設(shè)空白對照組（不加顯色劑），溶液搖勻放置30min，在波長為401nm處空白對照組校零后測定A值。數(shù)據(jù)處理得回歸方程:?A?=?10.727C-0.0307（R²=0.9996）。表明其濃度在0.0116?mg/ml～0.0696mg/ml范圍有良好的線性線性關(guān)系。

2.2?樹脂預(yù)處理