[發明專利]凋亡抑制蛋白Survivin基因核酸檢測探針、引物、試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201110302059.2
• 申請日: 2011-10-09
• 公開（公告）號: CN102409090A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 馬強;王業富;王美玉;鄭毅;鄭隆泗
• 申請（專利權）人: 鄭隆泗
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

1.一種凋亡抑制蛋白Survivin基因核酸檢測引物，其特征在于：包括如下的序列組：

包括下述正向引物，反向引物的一組序列：

正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.1所示：5'-?TGTGATTAGACAGGCCCAGTGA?-3'，

反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.2所示：5'-?CACAGCATCGAGCCAAGTCA?-3'，

或者在上述序列的5’端和/或3’端有延長的核苷酸片段的一組序列；

或者與上述序列的同源性大于85%的一組序列；

或者與上述序列的堿基互補的一組序列。

2.一種凋亡抑制蛋白Survivin基因核酸檢測的探針，其特征在于：為以下序列：

熒光探針如序列表中SEQ?ID?NO.3所示：5'-?CACATGCTGGCCGCT?-3'；

或者在上述序列的5’端和/或3’端有延長的核苷酸片段的一組序列；

或者與上述序列的同源性大于85%的一組序列；

或者與上述序列的堿基互補的一組序列；

其中，所述熒光探針的5’端和3’?端分別用FAM、MGB熒光基團修飾。

3.根據權利要求2所述的凋亡抑制蛋白Survivin基因核酸檢測的探針，其特征在于，其中熒光探針的5’端修飾的熒光染料選自：FAM，HEX，TET，JOE，VIC，ROX，Cy3或Cy5；3’端修飾的熒光染料選自：TAMRA、Eclipse，BHQ1，BHQ2，BHQ3或DABCYL。

4.一種凋亡抑制蛋白Survivin基因核酸檢測的試劑盒，其特征在于，該試劑盒含有：

（1）逆轉錄反應液，各組分含量的配比為：濃度為50?pmol/μl的Oligo?d(T)₁₈?Primers用量2??L、5×AMV?Buffer用量4??L、濃度為10mmol/L?的dNTP?Mixture用量1??L；濃度為40U/??L?的Ribonuclease?Inhibitor用量為0.5??L；濃度為5?U/??L?的AMV酶用量為1??L；

（2）FQ-PCR核酸擴增反應液，其中包括DEPC處理水、dNTP?Mixture、Taq酶、10×PCR?Buffer、含有Mg²⁺離子的溶液、Survivin基因正向引物、Survivin基因反向引物、Survivin基因探針；

Survivin基因正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.1所示：

5'-?TGTGATTAGACAGGCCCAGTGA?-3'，

Survivin基因反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.2所示：

5'-?CACAGCATCGAGCCAAGTCA?-3'，

Survivin基因探針如序列表中SEQ?ID?NO.3所示：

5'-?CACATGCTGGCCGCT?-3'；

其中，所述熒光探針的5’端和3’端分別用FAM、MGB熒光基團修飾；?

（3）?RNA提取液，Trizol?reagents，其中包括苯酚、8－羥基喹啉、β-巰基乙醇、異硫氰酸胍成分；

（4）?Hank’s液；

（5）陰性質控品，為不含Survivin基因的無菌DEPC純化水；

（6）陽性質控品，為1.0×10⁶copy/mL含Survivin基因的陽性質粒標準品；

（7）臨界陽性質控品，為1.0×10⁴copy/mL含Survivin基因的陽性質粒標準品；

（8）陽性定量質控品，為含Survivin基因的陽性質粒標準品，工作濃度為1.0×10^7?copy/ml，1.0×10⁶?copy/ml，1.0×10⁵?copy/ml和1.0×10⁴?copy/ml；陽性質粒轉入大腸桿菌TOP10進行增殖。